以非磁化及磁化子交换树脂为载体的果胶酶固定化研究.pdfVIP

以非磁化及磁化离子交换树脂为载体的果胶酶固定化研究 陈姗姗 摘要果胶酶是催化果胶物质分解的一类酶的总称。果胶普遍存在于各种水 果中，是水果细胞中层和初生壁的主要成分，果汁中的果胶对其粘度和浊度有较 大影响。在果汁加工中，加入果胶酶进行酶解工艺，可以提高出汁率，加速果汁 过滤，促进澄清。因此，果胶酶成为水果加工中应用最重要的酶。 由于果胶酶的价格相对较高，因此，果胶酶的回收和重复利用对水果加工业 是非常有利的。为了达到这个目的，常常将果胶酶固定到载体上。果胶酶固定化 技术是实现酶重复连续使用和稳定性改善的有效手段。 许多有机物和无机物都可以用来固定酶，离子交换树脂是工业上使用最广的 载体材料之一，它价格低廉，机械强度好，理化性能稳定，作为固定化载体有着 广阔的应用前景。近年来磁性高分子微球在生物医学、细胞学及生物工程等领域 的应用受到越来越广泛的关注。与其它载体相比，磁性载体更利于分离和回收。 本文以非磁化和磁化离子交换树脂为载体对果胶酶进行固定化研究，确定了 两种载体固定化果胶酶的最适条件，用扫描电镜对固定化酶进行了表征，并研究 了非磁化和磁化固定化果胶酶的酶学性质。主要试验结果如下： (1)通过以广泛应用于工业上的十种吸附树脂和离子交换树脂为载体，进行果胶 酶固定化筛选试验，确定固定化的最佳载体为D380大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交 换树脂。 (2)对以D380树脂为载体的果胶酶固定化方法及条件进行了研究和优化。最终 确立了最佳固定化参数为：固定化温度36～40℃，加酶量0．75mL／1．09树脂，固定 化时间6h，固定化DH值5．5，戊二醛交联浓度0．1％，戊二醛交联温度3。C～4℃， 戊二醛交联时间4h，在此条件下，固定化酶活回收率达到81．67％。。 (3)对以D380树脂为载体的固定化果胶酶的酶学性质进行了研究，并与游离果 胶酶进行了比较，研究发现：经固定化后，果胶酶的最适温度较游离果胶酶有所 提高，游离酶的最适温度为50C，而固定化酶的最适温度为60。C，其热稳定性明 显高于游离酶；固定化果胶酶的最适pH为4．0，游离果胶酶的最适pH为3．5，固 定化酶较游离酶有较宽的pH稳定范围。研究还得知：固定化酶有较好的重复使用 性，在使用10次后，还能保留较高的酶活力，达50％；在4C下，其贮藏稳定性 较游离酶有明显提高。 (4)对以磁化D380树脂为载体的果胶酶固定化方法及条件进行了研究和优化。 脂，固定化时间6h，固定化pH值5．5，戊二醛交联浓度O．01％，戊二醛交联温度 10C，戊二醛交联时间2h，在此条件下，固定化酶活回收率达到137．5％。 (5)对以磁化D380树脂为载体的固定化果胶酶的酶学性质进行了研究，并与游 离果胶酶进行了比较，研究发现：磁性固定化酶的最适温度为70C，游离酶的最 适温度为50℃，在30℃～60℃的范围内，热稳定性明显高于游离果胶酶；其最适 性固定化酶对pH的稳定性较游离酶有明显提高；其操作稳定性较以未磁化树脂为 载体的固定化酶低，在前6次的重复使用中可以保持较高的酶活力，达61．11％； 在4℃下，其贮藏稳定性较游离酶高。 关键词： 果胶酶 固定化 离子交换树脂 磁化 II Studiesonthe ImmobilizationofPectinase and bynon-magnetic magnetic Resin ion-exchange Chen Shanshan ， AbstractPectinaseisa of that various complexgroupenzymesdegrade pectic in su