与棕色棉纤维颜性状紧密连锁的分子标记研究.pdfVIP

j -、 ‘I ，， III[rl r fltlr l l I rl I I IIl 、t1735169 摘要 天然棕色棉是一种健康无害、生态效益高的特种棉，相比白色棉具有较高的 市场价值。为更好地加快棕色棉的育种进程，有必要筛选出与其纤维颜色性状紧 密连锁的特异性标记，并对获得的标记片段进行研究，探索利用分子标记进行棕 色纤维颜色基因选择的可行性分析，为利用分子标记技术辅助棕色棉育种加快育 种进程，开辟新的技术途径。 本研究利用棕彩选1号为父本，泗棉3号为母本，构建了F2群体，从中分别选 择颜色一致的单株分别构建棕色棉DNA池与白色棉DNA池用于研究，采用RAPD、 SRAP和EST-SSR分子标记进行连锁分析，筛选与棕色棉纤维颜色性状紧密连锁的 分子标记，为棕色棉相关性状的基因定位提供理论依据和参考。主要研究结论如 下： 1．用99对RAPD分子标记引物进行琼脂糖凝胶电泳，其中78个引物能扩增出 清晰的条带，有效引物的比例为78．79％，条带总数为351条，平均每个引物扩增的 条带数为4．5条。亲本之间有多态性差异的引物有20个，占引物比例的20．20％，利 用有差异的20个引物对两个DNA池进行扩增，经过两个DNA池反复筛选和验证， 发现20个引物在两个DNA池间均无差异性条带。 2．用88对S凡心引物进行琼脂糖凝胶电泳，78对引物能扩增出条带，有效引 物占88．60％：从中选出条带多且清晰地60对引物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，此60 对引物均能扩增出清晰可辨的条带，共扩增出2040条带，平均每对引物扩增34条 带。在两个亲本之间，共有9对引物具有多态性带型，占引物组合的10．23％。通过 两个DNA池反复筛选，上述9对引物在两个DNA池中均没有扩增出差异性条带。 3．为了进一步筛选与棕色棉纤维颜色性状紧密连锁的分子标记，对棉花EST 中SSR的频率及特征进行了研究，结果表明，在1．6bp的重复基元中，二核苷酸重 复基元的SSR重复频率最高，占总数的63．46％，其次是三核苷酸，占总数的34．04％。 是SSR的主要重复基元。并根据棉花EST中SSR的频率及特征，开发并合成了棉花 引物61对。 m dNTPs mmol／L mol／L mmol／L引物1．5I_tL，10 O．51xL，25 加入DNA模板30rig，10 引物进行筛选，结果表明共55对引物可扩增出条带，48对引物的PCR反应产物 电泳后产生比较清晰的条带，重复性好。 池，单株的共同验证，最终获得1个与棕色棉纤维颜色性状紧密连锁的EST．SSR 该序列所含开放阅读框与多种植物的氨基酸序列存在同源性，如与葡萄的未知蛋 白序列同源性达到85％，与玉米、拟南芥的线粒体内膜易位酶的同源性达到84％ 和67％，该序列可能是编码线粒体内膜易位酶功能基因的部分序列。 关键词：棕色棉，RAPD，SRAP，EST-SSR，DNA池 ‘ H The onMolecularMarkersLinkedtoFiber Study ColorofBrownCotton Abstr