天然食品防腐剂溶菌酶编码基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

中文摘要 人溶曲酶是存在于人体正常体液和组织中的一种非特异性免疫因子。它对人体完全无毒副作 用，同时具有抗苗、消炎、抗病毒、抗肿瘤等作用，可被开发成口含片、胶囊、口香糖及口腔喷 雾剂等产品形式。 由于人溶菌酶来源有限，因此本研究提出通过遗传工程方法，利用毕赤酵母细胞生产人溶菌 酶，一方面解决了人溶菌酶资源稀缺的问题，另一方面则能创造更大的经济效益。由于人胎盘组 的hLZM cDNA序列完全一致。 I和Not 通过EcoR I双酶切作用，将hLZM的编码基因按照质粒阅读框的转译方向插入到表 的宿主菌KM71，利用MD培养基筛选到近1200个His+转化子。再经G418抗性的二次筛选， 获得15株含高拷贝人溶菌酶基因的重组毕赤酵母转化子。当以甲醇进行诱导表达时，成功获得 035u／mL。 了1株高效分泌表达的重组苗株Ppl35，其表达量为317mg／L，酶活性为32 菌株Ppl35经甲醇诱导，可将人溶菌酶分泌到培养基中，因此可在发酵上清液中直接检铡到 人溶菌酶的活性。该检测采用以溶壁微球菌(Micrococcus 基BGMM和MMC中存在干扰溶菌酶纯化的杂蛋白，并使溶苗酶产品带有异味和色素，因而确 优化发酵条件，还有可能进一步提高菌株Ppl35的表达水平。 本研究为人溶菌酶的工业化规模生产奠定理论基础，这对带动人溶茵酶的规模化生产具有特 殊意义，其推广应用将给社会带来相当的经济效益。 关键词： Abstract Human akindof immunalfactor innormalhuman unspecific consisting lysozyme(hLZM)is was noharmfuland hasthe andtissues．It side·effecttohuman body completely body，and liquids function and had ofantibacterial，anti-inflammatory,anti-viralanti-tumor．Therefore，lysozymealready aswoche beenmadeintomultiform such in and keeping gum products mouth，capsule，chewing stomatitisaerosols． nature·the Due l℃sourcesin researchwhich this to human by lacking lysozyme producelysozyme a method．It for of out willbesettle amount wascarried Pichiapastoris bygeneticen