小金海棠缺铁消文库的构建及mxnas1基因的克隆与功能分析.pdfVIP

小金海棠缺铁消减文库的构建及MxNasI基因的克隆与功能分析 张玉刚 (中国农业大学园艺植物研究所北京100094) 中文摘要 苹果是我国栽培面积最大的经济树种，但缺铁黄叶病严重地影响了苹果的品质及其经济产 量。因而研究和克隆缺铁胁迫相关基因将为进一步研究苹果吸收、转运铁的分子机理以及基因工 程打下基础。 d 本试验以铁高效基因型植物一苹果属小金海棠(MalⅪxiaojinensis ChengJiang)为材料，以 Fe．EDTA)根的 缺铁处理(4ttMFe．EDTA)小金海棠根的eDNA为Tester，以正常供铁(40pM 之间。 为进一步确定阳性克隆，对构建的消减eDNA文库进行差异筛选，得到差异表达片段 列，可能代表了新基因。 在105个差异表达的EsTs中，其中有一个与编码番茄尼克胭酰胺合成酶基因有63％相似性， 登录号为DQ403256，该基因全长1305bp，开放阅读框为975bp，编码325个氨基酸。 Northern杂交结果显示，MxNasl基因在缺铁和正常供铁条件下的小金海棠根和叶中均表达， 但是在根中的表达量要明显高于叶中的表达量。缺铁处理5天后，Mx．Nasl基因在根中的表达没 有明显升高，10天到15天表达增强。而同样缺铁处理的叶片，直到15天表达仍然没有明显变化． 为了研究MxN∞I基因的功能，构建了小金海棠MxNasl基因正义和反义两种表达载体，并 用农杆菌介导的叶盘转化法转化了烟草及番茄突变体(Chlomnerva)．获得的转基因番茄能够互 补突变体的表型，即叶脉及脉间复绿；对转基因烟草进行不同浓度铁处理14天后，转正义载体 烟草在缺铁情况下叶片没有黄化，表现出了较强的抗缺铁能力：转反义载体植株比对照烟草幼叶 提前出现黄化现象，表现了更加不耐缺铁。另外，转正义载体烟草还出现了早开花现象。 对不同浓度铁处理14天后的转基因烟草Fe、Mn、Cu、Zn含量的测定结果表明：无论哪种 铁浓度处理，转正义载体烟草叶中Fe、Mn、cu、Zn的含量比对照均有所提高，根中则提高不明 显；转反义烟草时中除了／via的含量有所降低外，Fe、C“Zn的含量与对照楣比无明显差异。 关键词铁抑制性消减杂交尼克胭酰胺合成酶小金海棠转基因植物 IsolationandCharacterizationofFe Induced Deficiency Genesin Apple(Malusxiaojinensis) ZhangYugang forHorticultural (1n啪tute Plants,CAU，100094,BeiJing) Abstract Iron(Fc)isanessentialelementfor isaworldwideincrop plant．Fedeficiency problem whenFeis solubleincalcarenus is to soil．Therefore,itimportant production,especiallypoorly very andcloneFerelative will the for