小麦幼胚高频再及外源dna电击转化体系的研究.pdfVIP

缩写名词 小麦幼胚高频再生及外源DNA电击转化体系的研究 中文摘要 随着生物技术的发展，利用基因工程进行小麦品种改良越来越受到国内外育种家 的重视。但与同类作物相比，小麦不易建立高效成株体系，且小麦遗传转化仍处于建 立和优化完善体系的阶段，是妨碍小麦基因工程顺利开展的重要原因。小麦又是我国 主要的粮食作物之一，水分不足常限制其产量增加，改良小麦的抗旱性已成为倍受关 注的研究内容。为此。本文从三个方面进行了研究：①以10个不同基因型的小麦幼 穗、幼胚为外植体，建立小麦高效成株体系；②优化电击转化法的主要参数：③将抗 旱小麦外源DNA进行电击转化，并对转化植株进行形态观察、过氧化物酶和可溶性蛋 白质聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳分析。主要研究结果如下： 1正交试验研究表明，诱导培养基中附加2,4一D 0．4mg／L+NAA 2．0mg／L+KT 0．01mg／L+CH300mgm的组合最佳：基因型对小麦愈伤组织诱导率影响不大，而主 要影响到胚性愈伤组织诱导率(P0．01)；不同基因型幼穗和幼胚来源的胚性愈伤组 织中，基因型之间分化能力存在极显著差异(P0．01)；其中6—90的幼胚易培养，且 具有较强的丛生芽分化能力，是作为小麦遗传转化较为理想的受体材料。 养范围。 3培养基中的蔗糖浓度对胚性愈伤组织诱导有显著的影响(P0．05)，蔗糖浓度 509re最佳，高浓度的蔗糖(809／L)表现为抑制反应，且品种间受抑程度不同。 4低温(3—4℃)饥饿处理O一7d对小麦幼胚胚性愈伤组织诱导影响不大，7d以后， 出愈率和胚性愈伤组织诱导率均下降。 5随着继代次数的增加，胚性愈伤组织有向非胚性愈伤组织转化的趋势，在不 同的基因型与继代次数之间，非胚性化的程度分别表现出极显著的差异(PO．01)。 6 2，4．D不利于小麦胚性愈伤组织的分化，6-BA在胚性愈伤组织分化中的效 果优于KT， 分化率。O．8mg／L的IAA生根效果较好。 7在供试的6种移栽介质中，采取蛭石在上，腐殖质在下的方式，移栽成活率最 高，达到95．65％，而且植株的叶色翠绿，生长健壮。 8采用正交试验设计，电击转化大分子复合物FITC进入胚性细胞团中，在荧 光显微镜下观察发现一些细胞内有荧光发生，由此确定较适宜的电击转化条件为：电 压300V，电容值975uf，脉冲次数1次的组合最佳。 9利用上述的电击参数，将抗早小麦外源DNA进行电击转化，转化植株穗部发 生了较大的变异，有的雄蕊变成了羽毛状的柱头，无子房，个别小花只有很瘪瘦的子 房。小穗明显长长，有的出现多个麦穗。对转化植株进行聚丙酰胺垂直板电泳分析， 转化植株与对照之间过氧化物酶和可溶性蛋白质电泳谱带发生了明显的变化，表明转 化植株已发生了明显的变异。 关键词：小麦；幼穗；幼胚；胚性愈伤组织诱导；高频成株体系；外源DNA； 电击转化；可溶性蛋白质；过氧化物酶同工酶 Oil of of Studies Wheat Systems HighEfficiencyRegeneration from and Plants Embryos DNA Imm．ature Exogenous Transfer byElectro．)oration Abstract the of Withdevelopment has an role biotechnolo