柿果acc合成反义基因的遗传转化.pdfVIP

摘要 本研究以上西早生柿组培菌叶片为外植体，通过对离体叶片再生条件、抗生素筛 选条件和根癌农杆菌介导上西早生柿遗传转化条件的优化，建立了高频再生体系和遗 传转傀体系，并将A(玲合残酶基因毒入上瑟早生榜缝培麓中。{丛翳遴遗转墓阂静方 法抑制AcC含成酶的寝达，提高跃变挺果实的耐贮性能。主隳取得以下研究结果： 1．建立了褰效稳定戆土透霉堂蠡蠢缀培蓥时片霉生体系 通过对影响上西早生柿叶片再生的基础培养基、激素浓度配比、瞎培养时间和叶 片部位的研究，褥出含氮量低孵MS(1尼N)壤莽基适合上露晕生柿的叶片秀生，暗 培养lO天能提高上西早生柿叶片的薜生频率，叶片基部的再缴能力眈叶尖和叶中间 部位强，4．oIllg几的ZT能诱导上西早生叶片商效再生。在此条件下，上西早生柿的 叶片分纯频率这97。8％，平均每叶冀产生5．6个不定势。 2．研究了抗生索对不定芽再生和生长的影响，确定了适窳选择鹾。 逮遵上瑶警垒糖维培蘩霹敬生素戆敏感滢试验，确定豹选耩歪巍：时片分毒乏垮葬 过程中，用200删扎麸孢霉素作为脱藤培养的抑菌浓腋，20m牡壮观霉素作为对抗 性不寇磐懿掺选浓度{在抗性旗生长道程中，明l∞mg疋头孢撵索毅l嘛g疋壮溉霉 素进一步筛选转化抗徽苗。 建立7离效遗传转化体系，并将AcC合成酶藻因导入上鹾早生柿中。 遴过对叶片预培养时阉、浸聚时阐、浸染时菌滚浓度、AS浓度，共培养辩闻等 遗传转化影响因素的研究，建虚的上西早生柿遗传转化体系为：叶片预培养3天，用 O线∞凳e．3黪蘩渡澄繁ie分锌，荚臻莠4天。获褥豹主嚣举生棒攘疆骜经妖、餮扩 增检测，证实ACC合成酶基因已经转入上蔼早生柿基因组中。 4。上理晕生赫缀塔蓥生撩条转熬霹究 研究了基本培养基、激素种类浓度和暗培养时闻对上西阜生柿组培菌生根的作用 效果。结果袭明，l，2MS为最适基本培葬基，最佳的激素浓度与骶比为 玛A1．Om舻^lAAOm彬，，碚培养5天辩上嚣警生柿臻堵苗豹生根有狠大韵促谶作用。 在此条件下，上西早生柿组培茁的生搬率达到90％以上。 关键溺：上嚣警生；跨慧秀生；农抟蘩会导；蘧簧转纯； n跚sf衄瑚aonof也e Antisen辨G蛆ein ACC娜thase p盯谢nmon抒uit A耩瘀or：o鞋∞珏g{鞋鑫珏 aIld subject：P!rirna珂Pr硼uctProcessingStorageEn甜needng Pr0 Supervisof：Majunman A醅垃gIc￡ 融this bestconduc踟nof alld me established也rou曲selec曲g regcn瞰tion，trans触tion inSertedinto selec墩}nofUeniSlliwaseleavesin ACC hadb∞n an曲iotic vin现aIldgene ofclm追髓e晾；蕊it uenishiwase．、魄can讯甜ease氆e s幻fa誊ng缸聪娃on byrep辩ssing盘e 0fmeACC menlOd． nemain expression synth醛e船zylr峭wim悯啪genetic fes毽ltswe辑豁奶珏O轷s’