水稻单倍体染色加倍及不同倍性植株茎解剖结构比较研究.pdfVIP

致谢 本论文是在薛庆中教授的悉心指导下完成的。先生严谨的治学态度、忘我的工作精 神以及对学科前沿敏锐的洞察力翻孜孜不倦的科学作风时刻激励整我，并将让我受益终 生。值此论文完成之际，谨彝先譬兰表示衷心羽感谢和崇高敬敬寇。 特剐缮谦张宪银老师、凑建寓老师、过全生老师在实验过程中豹给予的指导与帮助。 感谢系领导和各位师长在三年的学习生活中给予我的的帮助和热心关怀。感谢刘庆坡博 士、朱惠琴博士、周元飞博士、季芝娟硕士、李娟硕士、燕树锋硕士、孙加焱硕士等在 本人实验及论文写作过程中给予的支持与合作，感谢郑安福先生在田间实验中的热情帮 助。兰年的学习积科研工作中，还得烈了其他各位师兄、师娥的帮助和鼓威，他们蹙： 冯英豫士、孙玉台博±、纣立惠潜±、陶华博士、ShaukatAli博圭、赵心爱溥士、应杰 政硕士、缀金锋硕士、闫忠静硕±，在戴一并致以诚挚姻谢意。 感谢共同生活三年的室友文平硕士、杨灵勇硕士、许镇墼博士在生活上无私的帮助 和鼓励，三年的相处，生活中的点点滴滴，让我们结下了深厚的友谊。 特别饔向我的父母和姐姐表示深深的谢意。他们的关心和支持是我奋发向上的巨大 动力源泉。谢谢他们在我漫长的求学生涯中对我的理解、鼓麟、支待和关心。“谁言寸 草心，掇铸三春晖”。今后我只有以更加的努力来酲报谴们的恿稳。 惑谲}在我求学路上所有关心、支持和帮助遥我的人们。 最后，向参加本论文评阅、答辩和对本论文提出宝贵意见和建议的所有专家、同行 致以蠼诚挚的谢意。 金亮 二oo六年五月于杭州·浙大华家池 V 摘要 花药培养技术作为产生变异和加快性状稳定的辅助手段，已在水稻育种上广泛应 用。通过花药培养获得的水稻植株中，具有丰富’的倍性变异，通常需在成熟期基于形态 特征识别单倍体、二倍体及多倍体。花培植株中的单倍体必需进行染色体染色体加倍才 能用于育种实践。本研究采用抗微管除草剂Oryzalin(3，5一二硝基∥，∥．丙基磺胺) 与秋水仙碱进行了水稻单倍体加倍效果的比较实验，并探讨了使用流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)进行倍性鉴定相关的技术及利用石蜡切片法对不同倍性的花培植株 茎解剖结构进行比较研究。其主要结果如下： 1．比较Oryzalin与秋水仙碱对水稻单倍体的染色体加倍效果，设置了三组处理。(1) mmol／L、2．50 分别用浓度为1．25 加倍处理(以一k各溶液均添加2％的二甲基亚砜)；(2)以添加2％的二甲基亚砜(DMSO) 的2 进行浸根24h加倍处理。结果发现，对于FC311添加2％的二甲基亚砜的1．25mmol／L秋 水仙碱和添加2％的二甲基亚砜的259mol／LOryzalin的加倍处理效率最高分别为30．6％ 秋水仙碱仍是水稻单倍体加倍的最有效的处理剂。 2．采用6种细胞核分离缓冲液制备用于流式细胞术分析使用的水稻细胞核悬液，发 nuclearisolation 现使用Ottobuffers和Marie’S buffer产生的变异系数较小(CV分别为 bufier LB0l(CV为4．75％)，但Ottobuffers的成分及 3．57％和3．4l％)，其次为Lysis buffers buffer产生较多的背景碎片。作者推荐使用Otto 制备的条件最简单。Tris—MgCl2 制备水稻细胞核悬液。 植株为材料，利用石蜡切片法研究和分析了它们茎的解剖结构。结果表明，供试材料节 间维管柬数及大小及、茎壁组织面积、维管束面积基本上随着倍性的增加而增加。而表 皮下和内、外圈维管束鞘的厚壁细胞层数及发育特征、各节间的基本组织细胞淀粉粒含 量、各节间维管束总面积与茎壁组织面积的比值与倍性无明显相关性。 4．通过花药培