水稻白叶枯病成抗性机理研究.pdfVIP

摘要 成株抗性是一种苗期表现为感病，生长发育到…定时期后表现为抗病的现象。 成株抗性在多种植物多种病害中存在。迄今为止，成株抗性的机理不甚清楚。作 者研究了水稻白叶枯病成株抗性生理生化特点，并从分子水平对其抗病性机理 进行了初步探讨，主要结果如下： 1．运用DDRT-PCR方法，用90对引物组合对水稻白叶枯病成株抗性品种早生 爱国3号苗期、成株期病原菌和清水接种材料进行了差异表达基因筛选。总 共约筛选了7000个基因片段，其中有9个基因为成株期病原菌诱导特异表达。 对3个差异表达片段进行了克隆测序，结果发现这3个片段编码序列相同， 即编码NADH脱氢酶。经Northern blot分析，其在苗期和成株期各处理间表 达无差异，这一结果表明筛选的基因可能为假阳性，另一种可能就是编码 NADH脱氢酶基因表现为转录后调节。 种病原菌和清水材料进行差异表达基因筛选。在筛选的约16000个基因片段 中，共检测到成株抗性相关的差异表达cDNA片段122个。对70个cDNA 片段进行了克隆测序。经同源序列比较，41个基因为已知功能基因，这些基 因包括参与光反应的基因、表达调控基因及防卫基因。29个基因为功能未 知基因。对2个基因进行Northernblot分析和22个基因进行RT-PCR分析， 其中11个基因差异表达明显。 3，为了探讨水稻白叶枯病成株抗性是否与生长发育及病原菌诱导的基因组甲基 sensitive 化水平有关，采用MSAP(methylatonamplifiedpolymorphism)技术对 早生爱国3号苗期、成株期接种病原菌、清水接种及未处理材料进行了全基 因组甲基化扫描。在所扫描的2000个基因片段中，共检测到甲基化多态性位 点380个，其中受苗期生长发育诱导的多态性位点为8．7％，苗期病原菌诱导 的为1．6％，成株期生长发育诱导的为O．5％，成株期病原菌诱导的为0．8％。 表明不同生育时期的甲基化水平可能与成株抗性相关。 4．为了探讨是否生长发育及病原菌诱导的转座子的激活与水稻白叶枯病成株抗 性相关，运用SSAP(sequencespecificamplifiedpolymorphism)技术检测了早生 爱国3号苗期、成株期接种病原菌、清水接种及未处理材料基因组LTR逆转 座子ToM7的拷贝数差异。在所检测的2000个基因片段中，苗期生长发育诱 导激活的而订7为O．45％，苗期病原菌诱导激活的Tosl7为0．15％，成株期生 长发育爵导激活的Tosl7为0．1％，成株期病原菌诱导激活的Tosl7为O．15％。 表明生长发育诱导激活的逆转座子可能与水稻白叶枯病成株抗性相关。 5．植物抗病反应最终通过防卫基因的表达而起作用。通过RT-PCR方法检测了 种病原菌和清水接种后不同时段的表达。结果表明，苗期只缸受病原菌诱导 上调表达，而成株期病原菌和伤害均可诱导PAL上调表达，成株期诱导表达 强于苗期。苗期和成株期病原菌都可诱导LOX表达，但成株期表达强于苗期 且更持久。PBZl在苗期和成株期均受病原菌和伤害诱导表达，成株期表达较 苗期早且更强。没有检测到PRla和Chtl的表达。 6．植物中活性氧物质及～些参与氧代谢反应的酶在植物的抗病反应中发挥着巨 大作用。为了研究这些物质是否在水稻自叶枯病成株抗性中发挥作用，分析了 水稻白叶枯瘸成株抗性与过氧化氢(H202)含量、过氧化物酶(POD)、多酚 系。结果表明：接种自叶枯病菌I7133后，苗期与成株期植株体内H202含量 上升以及POD、PPO、SOD活性增加。与苗期叶片相比，成株期叶片H202 含量高，且PPO和SOD的酶活性增强，而POD的酶活性则降低。苗期和成 株期CAT的酶活性均低于对照，成株期比苗期CAT活性更低。这些结果表明 H202、PPO、SOD和CAT可能与水稻白叶枯病成株抗性之间存在一定的关联， 而POD则没有直接关系。 II Abstract Adult a ofriesistance