水稻花期突变体筛选与分析.pdfVIP

摘要 生育期是决定水稻品种地区及季节适应性的重要性状，生育期的遗传研究与指导 育种实践、品种改良及品种推广密切相关。缩短水稻生育期，对提高水稻产量和改良 水稻品质具有十分重要的意义。突变体是进行基因功能研究的良好材料，近年来大规 模T-DNA标签库的创建产生了大量的突变体，包括早熟和迟熟突变体，利用突变体 克隆控制水稻花期的基因是可行的。同时，水稻作为短同照模式植物，将与长日照模 式植物拟南芥一起，在最终揭开植物成花机理的研究中发挥不可替代的作用。 本研究从独立的T-DNA插入标签系群体中(包括激活标签系和增强子捕获标签 系)筛选出花期突变体，并对突变体插入位点侧翼序列进行扩增与分析，完善了一套 利用标签突变体克隆基因的方法。获得主要结果如下： 1．对近5万份T-DNA插入标签系进行了田间调查和筛选，结果获得有明显表型的花 期突变体约350份。其中筛选到早熟突变体237份，晚热突变体126份。增强子 捕获系突变频率比激活标签系高0．1％。大多数早熟突变体与对照日本晴相比至 少提早抽穗一个月，少数突变体花期提早近2个月。有4株抽穗期延迟一个月仍 不能抽穗。 2．采用PCR．Walking方法分离扩增插入位点的侧翼序列，并对它进行了一些改进。 更多侧翼序列；第二轮PCR反应体系体积由209L变成400,L，药品用量相应加倍， 测序效率达88％。 T-DNA插入基因内与基因间没有偏好性。T_DNA标签系两个载体比较分析表明： 增强子捕获系扩增条带效率大于激活标签系，但是扩增得到有效水稻序列的效率 小于激活标签系。 4．阐明了T．DNA插入不同位置产生的效应。T-DNA插入引起基因功能失活或基因 表达量上升或下降。激活标签插入基因内导致基因功能失活，35S在基因上游和 下游对基因起激活作用；列举了多点插入同一基因和同一突变体多点突变等情况。 5．对插入位置的基因或基因编码蛋白的功能进行了研究，主要以Hdl、蛋白激酶为 主。对基因功能进行预测。得到了约60个候选基因，其中2个侯选基因已经通过 共分离得以确认。探讨了标签法克隆水稻花期基因与预期设想还有很大差距的几 方面原因。 关键词：水稻；突变体：开花；T-DNA；Tosl7 Rice and of Mu纽n臼in ScreeningAnalysisFlowering Author：GaoCj and Genetics Major：Crop Breeding Supervisor：Prof．MaZhi-ying Prof．WangXing-fen PmfLu Tie-gang Abstract dateiSall characterwhichdecidestherice areaandthe Heading important vailety date has associationto heredityclosely instructingbreeding seas∞compation．Heading ofvarietiesandthe the date practice，theimprovement varietypromotion．Makingheading is