玉米愈伤组织转及转基因植株的再生.pdfVIP

英文缩略词表 生查查、业=!j；兰堡主兰垡堡兰—』 摘 要 本文采用基因枪轰击转化技术将含有抗除草剂chlorsu|furon基因AHAS的 PCD220质粒导入玉米愈伤组织，并再生出具有抗该除草剂的转基因植株，同时研 究了影响玉米基因枪转化效率的因素。 厂 (用玉米胚性愈伤组织作为基因枪转化受体时，不同基因型在相同2，4-D浓度的 培养基上诱导，其诱导率有较大差别，齐319最高；胚龄对诱导率的影响也较大， 10天左右最易诱导，过大或过小均不易诱导胚性愈伤：培养基中2，4-D的浓度对玉 米愈伤组织的诱导率有极大影响，不同基因型的最大胚性愈伤组织诱导率所需的2， 4．D浓度也不相同，一般为0 5—1．omg／L。，丫 f 基因枪轰击时，金粉用量、轰击次数及轰击距离对愈伤组织的转化率有较大影 响。转化时，以金粉用量loo,g／枪，轰击两次，发射点与靶细胞的距离9cm最合适。 愈伤组织分化时不同基因型所需最适6．BA浓度不同，齐319、515的愈伤组织 最适合分化成苗的6．BA浓度为1mg／L，鲁原341愈伤组织最适6．BA浓度为O SmNL。 对所获得的转化植株进jTPCR分析及分子杂交鉴定，表明部分转化植株呈PCR 阳性，转基因植株的总DNASouthern杂交后有明显的杂交信号，而非转化的阴性对 照．ⅢlJPCR呈阴性，也无明显的Southern杂交信号，说明抗除草剂绿黄隆的基因 AHAS己整合到玉米基因组当中，将转基因植株进行自交，获得了T。代的种子。 关键词：玉米；转基因；基因枪：AHAS ! 堡皇兰! 至鲞垒堡丝塑壁垡墨堡墨里!堕堡塑要圭 ． 一 1．引言 transformation)是指重组DNA分子导入植物细胞或组 植物遗传转化(genetic 织，获得转基因植物的技术。植物分子生物学家和育种家经过长时间不懈的努力， 现已建立起来多种转基因技术，并获得了多种转基因植株，广泛应用于农业生产中。 玉米作为世界重要的粮食和饲料作物，其遗传转化受到世界各国科学家的高度重 视。自Go．on．kamm等”4’于1990年首次获得转基因玉米以后，许多分子生物学家 分别运用电击法、子房注射法、基因枪轰击法、PEG介导法、花粉管通道法、农 杆菌中介法等技术将外源基因导入玉米细胞组织中，获得了可育的转基因植株，显 示出遗传转化在玉米改良中的巨大潜力。 1．1玉米基因工程研究现状 l 1．1受体(receiver)系统的建立 植物遗传转化技术的关键环节是建立良好的受体系统。 自70年代以来，科技工作者对植物基因转化系统进行了大量的研究，先后建 立了许多高效的受体系统，适用于不同转化方法的要求和不同的转化目的。 玉米受体材料一般有以下几种：外植体、由外植体产生的愈伤组织、由胚性愈 伤组织建立的悬浮细胞系或悬浮细胞系分离出的原生质体等。在玉米转化中，外植 体、愈伤组织、悬浮细胞可作为基因枪或电击转化的受体材料，转化后的组织或细 胞经过组织培养再生植株。原生质体可用电击法、PEG法和脂质体法进行转化， 转化后的原生质体产生愈伤组织，进而再生植株…。 人们在研究中发现，外植体的来源部位、生理状态和基因型等因素对胚性愈伤 组织的诱导和植株再生有较大影响【ll。Hodges等”…、Green等…报道的胚性愈伤 组织和悬浮细胞系多来源于品系A118以及它的杂种后代。李世润等171以生产上推 广的12个玉米单交种和2个自交系为材料，通过优化培养基等方法，较大幅度地 提高了玉米愈伤组织的诱导率和再生植株频率，较好地克服了基因型障碍。在外植 体选择上，选择增殖能力强的、强再生力基因型及遗传稳定性好的外植体。 玉米组织和细胞的培养主要采用MS和N6培养基，二者对于不同品种和品系 玉米愈伤组织的植株再生影响不同。对于诱导产生出胚性愈伤组织，MS比N6效 果好，若由幼胚直接再生植株，则N6培养基效果更好，MS与N6的主要区别在 于氮源的形式不同。此外激素的选择也影响愈伤组织的生成，2，4-D是影响组织 脱分化的关键因素，较高浓度的2，4-D(