最新抗体的制备及应用.ppt

第八章 抗原抗体反应  及应用 一、抗体的制备 抗体的一些基本概念 单克隆抗体 (Monoclonal Antibody,McAb) 单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体 多克隆抗体 (Polyclonal Antibody) 多个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体 抗原（antigen ，Ag） 表位，抗原结合位点，抗原决定簇（epitope） 单克隆抗体的特点 特异性强，具有抗原结合位点的专一性。（不是抗原的专一性！） 因结合位点的单一性，有时不易捕捉抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产生凝集反应或沉淀反应。 多克隆抗体的特点 多抗是单抗的混合物，因此多抗的性质是一个群体综合的性质。 特异性一般比单抗差 因为由不同性质的抗体组成，所以多抗更容易有交叉反应。 比单抗更容易捕捉抗原。 因为含有抗不同表位的抗体，多种抗 体都可与抗原结合。 抗体的制备 1、单克隆抗体的制备 无法采用生物化学的方法从多抗中分离 必须采用细胞杂交的方法来制备 能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问 题也有机遇问题 制备单克隆抗体的基本原理： 致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （myeloma） （能够分泌特异性的抗体 ， （不能分泌特异性的抗体， 不能在体外长期生存 ） 但能在体外长期生存） 阳性杂交瘤细胞 (hybridoma) （既能分泌特异性抗体， 又能够在体外长期生存） 克隆化培养 （产生单克隆的阳性杂交瘤细胞） 生产单克隆抗体 2、多抗的制备 常用的免疫动物 免疫的基本步骤 如何免疫兔子 1）常用的免疫动物 兔子（rabbit）：最常用于自制抗体， 抗体量较多。（新西兰,大耳白） 小鼠（mouse）：可用于自制抗体，但 抗体量很少。（BALB/C,昆明鼠） 大鼠（rat）：可用于自制抗体，免疫过 程要麻醉动物。（Wistar大鼠） 羊（sheep、goat）：常用于较大批量地 生产抗体（商品）。 马（horse）：常用于大批量生产治疗用 抗体（商品）。 豚鼠（guinea pig）：国外实验室常用。 2）免疫的基本步骤 基础免疫：首次，抗原用量大，用佛式完全 佐剂（含矿物油,卡介苗等)。 加强免疫：第2次以后，抗原量减半，多次， 间隔2-4周，用佛式不完全佐剂 (不含卡介苗)。 取血测效价： 加强免疫两次或三次以后的第7天取血。 放血制备血清： 最后一次免疫后7-10天放血。 (在三角瓶中加一些生理盐水，放血放置一段时间，凝固，吸取血清，离心，分装，冻存) 3) 如何免疫兔子 2000g(雌雄均可),健康,无病原（小鼠20g，大鼠200g） 基础免疫 0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108颗粒抗原) 0.5ml佛式完全佐剂(CFA)（小鼠0.2ml） 制备抗原-佐剂乳化液 背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射（注意：不要剪毛） 加强免疫 间隔2-4周,可进行多次 0.5ml抗原(蛋白量减半) 0.5ml佛式不完全佐剂(IFA) 制备抗原-佐剂乳化液 背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射 免疫3~4次以后从耳静脉取血检测效价 酶联法：1:104以上，能达到1:106。 免疫双扩散： 1:16以上，能达到1:64 效价达到要求的可放血制备血清 可一次放血(颈动脉) 也可多次取血(耳静脉) 单抗与多抗的区别