益生菌lactbacillus casei zhang长期连续传代过程中遗传稳定性研究.pdfVIP

摘 要 本研究以从我国少数民族地区自然发酵酸马奶中分离、筛选得到的一株益生乳酸 菌Lactobacillus casei Zhang 为研究对象，以普通 MRS 培养基和碳源限制性 MRS 培 养基作为连续培养的基质，以 1%接种量每 24h 传代一次，每个传代周期菌株生长 log 100≈6.64 代，分析其在长期连续传代过程中的表型特征、益生特性及基因组水平 2 的变化，对该菌的稳定性做出系统评价。 研究结果显示，在连续培养 2000 代期间，L. casei Zhang 的细胞和菌落形态没 有变化，且连续培养并不会改变培养周期内总生物量和周期末活菌数；对各种碳 水化合物的代谢能力也没有改变，且菌种活力保持良好。益生菌 L. casei Zhang 在两种培养基中连续培养 2000 代期间生长情况持续较好，具有非常稳定的表型特 征，没有发现衰退现象。对益生菌 L. casei Zhang 的基本益生特征的跟踪分析表明， L. casei Zhang 对 pH2.5 的人工胃液以及 pH8.0 的人工肠液耐受能力、胆盐的耐受 能力无变化，反应益生菌粘附性的自凝集率也没有受连续培养代数及 MRS 培养 基种类的影响而发生变化，益生菌L. casei Zhang 的这些益生特性在连续培养 2000 代期间均较稳定。利用 Miseq 高通量测序平台，在对 L. casei Zhang 在两种培养基 中连续培养至 1000 代和 2000 代的基因组重测序分析，共发现 44 处 SNP 突变位 点和 23 个 InDel 突变位点。碳源限制性 MRS 培养基中 1000 代中发现 SNP 突变位点 平均数量少，多数为高频突变，一旦建立，将稳定遗传，显示经历了选择压力；在 2000 代菌株中高频率 SNP 突变位点增加 2 个，表明此时选择压力已经下降，出现种 群分化现象。同时，在两种培养基中 L. casei Zhang 传代菌株中均发现在基因 rpoC 中出现了高频率突变，据此推测L. casei Zhang 在不同培养条件下发生着一种趋同进 化，高速生长的细菌占有竞争优势。 总体而言，益生菌 L. casei Zhang 的基因组在两种培养基中连续传代培养 2000 代过程中高频突变较少，并且 1000 代低频突变在 2000 代有消失的迹象，可能菌株已 适应在这一类似的环境，并在这一环境中可长期生存。从基因组水平编码基因的突变 水平证实了L. casei Zhang 在长期传代培养过程中具有稳定表型特征及益生特性。 综合以上研究揭示益生菌L. casei Zhang 在连续培养时具有良好的遗传稳定性，是 一株不可多得的可安全使用的益生菌菌种。 关键词：益生菌；Lactobacillus casei Zhang ；连续传代；遗传稳定性；基因组重测序 Study on Genetic Stability of Probiotic Lactobacillus casei Zhang during Long-term Continuous Subculturing Abstract As the project object, a probiotic strain of Lactobacillus casei Zhang was isolated from koumiss in the minority areas of China. This project was aimed at evaluating genetic stability of Lactobacillus casei Zhang systematically, thus during long-term continuous propagation, morphological characteristics