铜陵药用牡丹根病菌生物学特性及遗传研究.pdfVIP

摘 要 本论文首先对安徽铜陵地区牡丹根腐病原菌进行了分离与鉴定，并从生物学特 性、生物学性状的遗传稳定性、营养体亲和性、同工酶电泳分析及有效杀菌剂筛选等 方面对牡丹根腐病原菌进行了较为系统的研究，主要结果如下： 1牡丹根腐病原菌的鉴定 从铜陵地区发病的牡丹上分离到12株根腐病原菌，通过对其形态特征与培养性状 solani(Mart．)Sate．】。 确定为茄病镰刀菌[Fusanum 2牡丹根腐病菌生物学特性的研究 solani)的研究结果表明，该菌多数对单糖、双糖、 对牡丹根腐病菌(Fusa—um 多糖等碳源及有机氮和无机氮均能够利用。其中葡萄糖、麦芽糖、甘油为适宜碳源， 产孢量以果糖最高。以有机脲为氮源培养基上产孢量最高。蛋白胨为最适宜的氮源培 养基，病原菌在其上生长速率最大。全黑暗条件下气生菌丝较多，产孢量也最高。PSA、 淀粉、PDA和茄汁是适合病原菌菌丝生长的培养基。该菌在10·35(2条件下均能生长， 子萌发率达到最大；孢子致死温度为55C。病原菌在pH4．1—11．5之间均能生长，其中 在pH5．5-7．0之间病原菌丝生长最好；pH在7．0时分生孢子的萌发率最高。 3生物学性状遗传稳定性 试验结果表明，牡丹根腐病菌(Fsolani)的菌落形态和和菌丝生长速率在无性 单孢后代可以稳定遗传，单孢后代之间差异不显著。菌株MD-1-5和GH—l一1的各代单 分生孢子株在菌落形态上与其对应亲本之间基本相同，其菌落近圆形，边缘规则整齐， 质地均匀，气生茵丝较少。菌株MD．1．5和GH-1．1的各代单孢株在生长速率上较为相 似。菌株F-3各无性单孢株后代的菌落形态和生长速率与亲本是相似的，F-3各单孢株 问与亲本在生长速率上均无显著差异。 4营养亲和性测定 利用氯酸盐培养基对分离得到12个牡丹根腐病菌(Fsolani)进行诱变，共获得 株，nitM型16株。来源于同一野生菌株的不同类型nit突变体间可产生互补反应而形 成异核体，其中以nitM型突变株互补性最好，将各菌株的血突变株和测试菌株的nitM d)后，除4株恢复成野生菌株外，其余多数nit突 株分别在PDA斜面上转管培养4次(80 变菌株表现稳定。 5．酯酶同工酶及可溶性蛋白电泳分析 采用同工酶电泳技术，‘对采自安徽铜陵的12株牡丹根腐病菌(FusariumJolani) 菌株进行了酯酶同工酶和可溶性蛋白分析。结果表明，供试的12个牡丹根腐病菌菌株 的酯酶同工酶在RfY90．78处各有1条酶带，但各个菌株酶带的深浅、浓淡均有差异， 根据酶带的强弱可以将其分为3种类型。12个菌株的可溶性蛋白图谱存在较大的差异， 根据各菌株的主谱带数可将其分为4种类型：A型具有8条主谱带，共2个菌株，占供 试菌株的16．7％；B型具有7条主谱带，共8个菌株，占供试菌株的66．7％；C型和D型 分别具有6条和5条主谱带，各有1个菌株，均占供试菌株的8．3％。从谱带迁移的位置 可以看出，12个供试菌株的可溶性蛋白图谱主要分布在3个区域内：区域IRf为 0．24加．36；区域II 为0．42处的3条谱带为安徽丹皮根腐病菌的特征性谱带。酯酶同工酶和可溶性蛋白电 泳均表明各供试菌株在遗传上具有相似性且种内变异程度较小。 6牡丹根腐病菌有效杀菌剂筛选 分别以菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的毒力。 菌丝生长速率法测定毒力的结果表明，6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的Ec。值大小顺序 为：嘧茵酯百菌清恶醚唑代森锰锌多菌灵咪鲜胺；咪鲜胺对牡丹根腐病原菌 具有十分显著的抑制效果。孢子萌发法测定毒力的结果表明，百菌清对牡丹根腐病原 菌孢子萌发的毒力最强，EC50值为0．343mg／L；咪鲜胺、恶醚唑、多菌灵、代森锰锌 毒力依次减弱；嘧菌酯的毒力最小。 关键词：牡丹根腐病，茄病镰刀菌，生物学特性，营养体亲和，同工酶 Abstract Thecausal oftree rootrotwasidentifiedanda research organismpeony systematic Oll