马铃薯病毒病r-pcr检测体系的建立及病毒病在四川省的种类与分布.pdfVIP

摘 要 马铃薯是一种极易感染病毒的茄科作物，目前已报道的感染马铃薯的病毒多达 35种以上，其中危害严重的有6～7种。病毒的侵染除直接引起马铃薯病毒病外，更 重要的是导致种质退化，引起产量的急剧下降，成为制约马铃薯生产的主要因素之一。 virusX，PVX)、 我国主要危害马铃薯的病毒有5种，它们分别是马铃薯X病毒(Potato virus virus 马铃薯Y病毒(PotatoY，PVY)、马铃薯S病毒(PotatoS，PVS)、马 virus 铃薯A病毒(Potato LeafRollVirus， A，PVA)、马铃薯卷叶病毒(Potato PLRV)。 目前，酶联免疫方法是普遍采用的马铃薯病毒检测方法，它可直接提取罹病毒叶 片粗汁液检测，在短时间内检测大量样品，因此适宜大量的样品检测，但存在制备血 清费时、成本高、灵敏度不足的缺点。病毒基因反转录扩增检测方法(RT-PCR)是一 种近年新兴的建立在病毒基因水平的检测方法，具有检测快速，灵敏度高，特异性强 的优点，在马铃薯病毒的检测上具有更大的应用前景。目前国内大多省份还没有建立 马铃薯病毒RT—PCR方法，因此，针对我国主要发生的马铃薯五种病毒建立RT-PCR 检测体系具有重要现实意义，本文根据国内外文献报道的上述五种马铃薯病毒病的扩 增引物，分别从感染病毒的马铃薯叶片中提取植物的总RNA，反转录合成cDNA并进 行PCR扩增，得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物，分别建立了上述五种 马铃薯病毒的RT—PCR检测体系，并将建立的体系实际应用于四川省的马铃薯病毒病 的鉴定，在分子水平上为四川省的马铃薯检测提供了新的手段。 四川省近20年来未对马铃薯主产区病毒病的种类和分布进行调查，为了解马铃薯 病毒病在四川的种类和分布，为抗病品种选育、建立脱毒种薯的质量控制体系及最终 控制马铃薯的退化速度，本研究在四川省马铃薯主产区内平原、丘陵、高山等不同生 态区21个县区采集了罹病植株、脱毒试管苗以及薯块等981份样品，利用酶联免疫方 法(ELISA)，采用8种马铃薯病毒抗血清，对所有样品开展了病毒种类和带毒率的检 测鉴定，从而对四川省马铃薯主产区的马铃薯病毒病的种类和分布情况进行了调查。 关键词：马铃薯病毒；酶联免疫(ELISA)；反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)； 病害普查 TheestablishmentofRT．PCR andvarietiesand system distributionof virusesinSichuan potato ZhongTingting(PlantPathology) Directed Wenzhao min，Yan byZhang Abstract PotatoisakindofSolanaceaewhichis viIUSe3．At infected plant easily by present， therearemorethan35differentviruseshas in been toaffect theworld