东亚飞蝗体内痕环腺苷酸的液相色谱分析.pdf

摘 要 环腺苷酸(3’，5’一cAMP。adenosine3’，5’--cyclicmonophosphate)作为生物体内普 遍存在的第二：信使不论在脊椎动物还是无脊椎动物中都发挥着重要的生理功能。建立快速灵敏的 方法检测cAMP在生物体内的含量是一项非常有意义的研究。 实验建立了高效液相色谱一荧光检测器和高效液相色谱一质谱联用检测东弧飞蝗中央神经 系统(CNS)内cAMP的含量的方法。cAMP用2一氯乙醛衍生化后会有较好的荧光响应，用含有 TBAS的缓冲盐和甲醇做流动相，用高效液相色谱连接荧光检测器检测，方法的检测限(LOD)可 达到1 约为0．0lpmol／ml。这种非放射性的检测方法适合检测昆虫等小生物样本体内痕量cA忡的含量。 高效液相色谱一质谱联用检测cAMP的方法也得到了研究和发展。比较了离子阱质谱正负离子和 单级多级模式对检测方法的影响，最后确定用DiWHA作为离子对试剂，用离子阱质谱的多级负离 子模式检测。 cAMP信号途径在生物信号的跨膜传输过程中发挥着重要作用。东业飞蝗巾央神经系统中含有 章鱼胺(OA)受体，章鱼胺可以导致腺苷酸环化酶(ACE)活性增强从而使东Ⅱ飞蝗体内cAMP含量增 加。通过测定生成的cAMP含量可以筛选对章鱼胺受体有活性的化合物作为新农药开发的先导化 合物。因为人体不含章鱼胺受体，如果以章鱼胺受体为靶标开发新农药，可能会研发出新一代低 毒高效的农药。本文设计了离体条件下尔砸飞蝗中央神经系统中的腺苷酸环化酶反腌．实验用这 种高效液相色谱的检测方法测定了章鱼胺刺激前后东Ⅱ飞蝗中央神经系统中cAMP的含晕的变化。 OA 不加oA刺激，蝗虫CNS中ACE反应的vAMP基础含量为0．417±0．009pmol／每只，用lmH 刺激以后，cA肝的含量增加为1．505±0．003pmol／每只。实验为下一步开发新型低毒高效农 药提供方法支持。 关键词：环腺苷酸；章鱼胺；东砸飞蝗：高效液相色谱；高效液相色谱一质谱联机；荧光衍生 Abstract the 3’，5’一cAMP(adenosine3’，5’--cyclicmonophosphate)asubiquitous functionsinbothvertebratesandinvertebrates． intracellularsecond serveddiverse message Asensitiveand methodwas forthedeterminationoftAMPin rapid developed Locusta manilensis with liquidchromatography migratoria Meyenbyhigh·performance cAMPWaSderivatized for fluorescencederivation．The using2-chloroacetaldehyde TBAS asthemobile Iimitof fluorescencedetectionand a buffer／methanel pha∞．nle using l fmol／mlfluorescencedetectionwithourmodifications． achieve detection(LOD)couldby Good recoveries