嗜热毛壳菌纤维酶液体发酵条件和内切β-葡聚糖酶的分离纯化.pdfVIP

英文缩略表及中文对照表 山东农业人学硕L论文 摘 要 纤维素是目前为止世界上植物生物量中含量最丰富的碳水化合物，可以被纤维 素酶转变成为葡萄糖，具有很大的开发前景。真菌的纤维素酶可分成三类：外切葡 聚糖纤维二糖水解酶、内切葡聚糖酶和B．葡聚糖酶。这三类酶协同作用降解纤维素。 嗜热真菌(thermophilicfungi)产生的纤维素酶在高温条件下具有高活力和稳定 性；并且与中温真菌一样，嗜热真菌产生的每类纤维素酶普遍含有多种类型的组分。 嗜热真菌Chaetomium thermophile是一种腐生真菌，分布很广，能够在45℃～50℃的 高温下繁殖生长，而绝大多数的真核生物若长期暴露在40。C～45C下将不能存活。嗜 热毛壳菌(Chaetomium thermophile)是一种能够产生纤维素酶的嗜热真菌，但目前 关]二这方面的研究还不多，特别是在国内尚未见报道。 本研究的第一部分主要对嗜热真菌Chaetomi{tm thermophile产生纤维素酶的液体 发酵条件及其滤纸酶(FPA)雕J特性进行了研究。f采用液体发酵培养法，通过对碳源、 氮源、培养时间、液体培养基的起始pH值及产酶过程中培养液中pH值和蛋白质含 量变化的研究发现：在以2％纤维素、l％可溶性淀粉为碳源，2．0％KN03+0．2％酵母 为氮源．液体培养基的起始DH值为6．5，50℃下液体发酵培养8d一9d后，各种酶活 力最高。发酵过程中，培养液的pH值和蛋白质的含量均在前3d下降，后升高，其 变化与菌丝的生长和产酶在时间上相一致。FPA的反应最适温度和pH值分别为60 ℃和5．5“．0。FPA具有较高的热稳定性．在50℃“5℃下保温lh，活性没有损失； 80C下保温1h，仍有5％的相对酶活。FPA耐酸性，在pH4．5～6．0范围内稳定。广丫 本研究第二部分主要探讨了液体发酵嗜热真菌Chaetomium thermophile产生的 内切B一葡聚糖酶的分离纯化及特性。姐酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE．sepharose S-100分子筛层析等步骤获得凝 阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析、Sephaeryl 胶电泳均一的内切D．葡聚糖酶。经12．5％SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤层析 法分别测得所分离纯化酶蛋白的分子量约为67．8kDa和69．8kDa，并且通过糖染色反 应确定该酶蛋白为一种糖蛋白。由芬兰Turku生物技术中心完成该酶的晶体结晶， 为今后该酶三维空间结构的分析和同类型酶蛋白的结晶打下了基础。内切D一葡聚糖 酶反应的最适温度和pH分别为60℃和4．0,-4．5，并且具有很高的热稳定性和耐酸性。 在pH5．0条件下，该酶在60℃下稳定；70℃保温lh后，仍保留30％的活性：在80 对内切D．葡聚糖酶的活性影响较大，其中Na对酶有激活作用；Fe”、Af、cu”、 Ba2+、Zn2+等对酶有抑制作用。薄层层析和酶的底物特异性实验表明该酶不能水解纤 维二糖，对含有B．】，4-糖苷键的分子化合物具有专化性，其水解微晶纤维素的产物为 寡糖(C3或c4或c5)；并且对结晶纤维索也没有水解能力，而对羧甲基纤维素具 有很高的活性。y7 ／，√ …．…一 7 关键1剐： 嗜热毛壳菌；纤维素酶：液体发酵；内切B．葡聚糖酶；纯他与叶生顿《 文献综述 Literature Review 山东农业大学硕士论文 纤维素酶的研究进展 摘要：纤维素的生物转化是全世界范围内研究的重要科研领域之一。本文就国内外 对纤维素酶的降解机制、分子结构和功能、纯化和基因克隆、生物合成与分泌及应 用等方面的研究作一介绍，并展望了纤维素酶的研究应用前景。