四个候选基因在成肌细胞和肌肉组织的mrna表达特征分析.pdf

Anhui Agricultural University Master Degree Dissertation The mRNA Expression of four candidate Genes for muscle development in chicken with the differentiation of myoblasts and development of muscle Postgraduate:Fangjie Wang Supervisor: Prof. Runshen Jiang Specialty: Animal Genetics, Breeding and Reproduction Research Field: Animal Molecular Genetics College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, 230036 Hefei, Anhui, P.R.China June, 2013 本论文受以下项目资助 国家肉鸡产业技术体系（CARS-42） 国家高技术研究发展计划(2011AA100301) This paper is supported by： National broiler industry technology system of China (CARS-42) National High Technology Research and Development Program of China (2011AA100301) 摘 要 产肉率是肉鸡育种的重要经济性状，筛选、验证相关的功能基因是开展分子辅助 育种的基础。在前期的研究中，已利用60K SNP 芯片，在北京油鸡群体中筛选出与 胸肌重、腿肌重显著相关的突变位点及候选基因。本研究选择显著相关的四个基因， 通过在成肌细胞增殖分化期、胚胎期和肌肉生长发育不同阶段mRNA 的时空表达特 性分析，阐明其与肌肉生长发育的关系，为鉴定基因功能提供理论依据。 1、组织特异性表达。检测了4 个候选基因在 14 日龄北京油鸡心肌、胸肌等 10 个组织中 mRNA 表达量。NCOA7 、MYCN 和HDAC2 在腿肌中的表达均高于其他各 组织，GJA1 在肌胃、心脏组织中有较高的表达。 2 、胚胎期至生长发育期的时空表达特性。以北京油鸡为素材，取孵化 14 至 21 胚龄各6 枚鸡胚胸肌和腿肌组织；采集出雏至生长98 日龄（0,28,56,70,84 和98 日龄） 各 10 个个体的胸肌和腿肌组织。利用Q-PCR 技术检测mRNA 表达量。结果表明： NCOA7 在4 个胚龄的胸肌和腿肌组织中表达呈先上升后下降趋势，18 胚龄表达量最 高(P0.05)；出雏后0-98 日龄生长阶段在胸肌中表达量呈先上升后下降趋势，56 日 龄表达丰度最高；MYCN 在胚胎期胸肌中的表达呈上升趋势， 0-28 日龄胸、腿肌中 表达量呈急剧下降趋势，28 日龄后变化不显著，并维持在较低水平；HDAC2 与MYCN 具有类似的变化趋势；GJA1 在胚胎发育后期胸、腿肌中表达呈先上升后下降趋势， 出生后胸肌中0-28 日龄阶段的表达量无显著差异，以后呈现持续上升趋势。 3、成肌细胞增殖分化期的表达特性。取 16 胚龄的 SPF 鸡胚，分离获得原代成 肌细胞培养72h，收集细胞检测增殖期候选基因表达情况。当细胞生长至80%时，更 换为含5%马血清的DMEM 培养基进行诱导分化，并收集12- 120h 的成肌细胞检测分 化期基因