最新第五章酶学诊断.ppt

目的：学习并掌握血清酶的基本知识及其在临床检验诊断中的应用。学习内容：第一节 概述第二节 酶测定技术第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用 (一)酶的组成、结构与功能 组成 酶的功能及其特性 功能： 对生物体内的化学反应起催化作用。 酶催化作用的特性： 高度催化效率、高度特异性及高度可调 节性。 （二）酶的催化作用机制 【酶促反应动力学】 概念 研究各种因素对酶促反应速度影响的学科---酶促反应动力学。 酶促反应速度：用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量表示 【Km】 Km的定义 酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度(v)达到最大速度Vmax，即在过量底物存在下的零级反应期的速度。 酶促反应的最适条件： 我国检验学会文件提出的最适条件为 选合适的底物、辅因子、活化剂、变构剂的种类和浓度。 指示酶和辅助酶的种类和浓度。 反应混合液的最适pH，缓冲液种类和浓度。其它影响酶活性的因素，如去除各种抑制剂。 在某些情况下，为了获得更好的测定重复性或更大的临床价值，可考虑对上述“最适条件”作适度的修改。 (三) 酶的命名 习惯命名法：根据酶所催化的底物、反应的性质以及酶的来源等进行命名。 系统命名法：规定每一种酶均有一个系统名称，它标明酶的底物与反应性质，底物之间以“：”分隔开。 应用：为应用方便，对每一个酶同时推荐一个习惯命名。 (四) 酶的分类与编号 氧化还原酶类（oxidoreductases） 转移酶类（transfereases） 水解酶类（hydrolases） 裂解酶类（lyases） 异构酶类（isomerases） 合成酶类（synthetase） 临床常用酶的名称与编号 直接连续监测法： 特点： 使用各种分析手段，在不停止酶反应条件下直接测反应体系中底物或产物的变化，从而计算出酶活性浓度。 应用最多的方法为分光光度法。 应用最广的反应系统 NAD(P)H，可以测定大部分的脱氢酶， 色素原底物，其本身为无色或微黄色，在酶作用下生成有色化合物，适用于测定水解酶和一些转移酶。 指示酶、辅助酶催化的最大反应速度必须远远大于测定酶，其所催化的反应必须在中间产物浓度很低的条件下进行，并且将此很快转变为最终产物，反应体系中不应有中间产物堆积，否则导致误差。 （五）部分分析前因素对酶活性测定的干扰 1.溶血 2.抗凝剂 3.标本储存温度 三、同工酶的分析方法 （一）电泳法 同工酶氨基酸组成不同，等电点不同。 简单快速、分离效果好，不会破坏酶的天然状态。 应注意巨球分子酶的形成 ①酶与免疫球蛋白形成复合物 ②酶与其他蛋白形成复合物 （二）层析法 离子交换层析和亲和层析等常用于同 工酶的提纯与制备，也可用于临床同工酶 常规检测。 （三）免疫分析法 同工酶一级结构不同，免疫化学性质不同。 （四）同工酶的其他分析方法 第三节 常用酶及同工酶测定的 临床应用 血清酶的去路 ①血清酶的半寿期(T1/2)： 酶失活至原来的一半时所需的时间。是衡量酶从血清中清除快慢的指标。 ②血清酶的失活和排泄： 酶主要在血管内失活或分解。酶经蛋白酶水解成低分子多肽或氨基酸，重新利用或排出体外。 （二）血清酶的生理差异 性别：男性CK、ALP、GGT较女性高。 年龄：儿童ACP、ALP较成人高；新生儿CK、LD较成人高。 进食：高脂、高糖饮食可使ALP增高；长期饮酒可使GGT增高；禁食可致AMY降低。 运动：激烈的肌肉运动可使CK、LD、AST、ALT等增高。 妊娠：妊娠时可使ALP、LD、LAP增高。 其他：如种族差异、体重、身高、体位、昼夜变化及家庭等。 （三）血清酶的临床应用 酶合成异常 合成减少：器官病变及酶基因变异时引起酶合成减少。 合成增多：增生性疾病可致酶合成增加；酶诱导作用可使一些血清酶活性增高。 酶释放增加 酶从病变细胞中释放增加是疾病时大多数血清 酶增高的主要机制。 二、尿液酶 正常尿液中酶的含量极少，当泌尿系统发生病变，由肾小球滤过或由肾小管分泌至尿液中。 AMS（尿淀粉酶），主要见于胰腺炎。 NAG，来自于近曲小管上皮细胞，是各种肾实质早期损伤的敏感标志物。也是糖尿病性肾病早期发现和病程监测的重要项目。 三、浆膜腔积液酶 鉴别漏出液和渗出液。 确定积液的病理来源。 结核性积液中ADA活性增高。 四、脑脊液酶 转氨酶活性增高见于大多数急慢性中枢系统疾病，AST增高可用于诊断老年痴呆症。 LD活性增高常见于各种脑疾病引起的脑组织损伤、细菌性脑膜炎、恶性肿瘤。以LD2增高为主，特别是恶性肿瘤。 NSE是癫痫持续状态后脑损伤的敏感指标。 CK和CK-BB 用于反映