甲基睾酮(mt对雌性及未性分化斑马鱼(danio rerio)的影响.pdfVIP

摘 要 摘 要 斑马鱼（Danio rerio ）是一种典型的小型热带观赏鱼。由于其具有个体小、产卵多、发 育快、体外受精、胚胎透明、易于观察、饲养简便等优点，被广泛应用于发育生物学、遗传 学、环境毒理学、免疫学等学科，斑马鱼也因此成为研究背景最广泛的脊椎动物模式生物之 一。本文以斑马鱼为研究对象，运用组织学、毒理学及繁殖生物学等方法比较深入研究不同 浓度乙醇和MT 对斑马鱼成活率、生长及性腺结构的影响。 采用波恩氏液固定、常规石蜡切片的方法观察斑马鱼卵巢结构及发育情况。结果表明， 斑马鱼卵巢为封闭型，分为左右大致对称的一对，90 日龄左右达到性成熟。成熟卵巢乳白色， 卵巢内充满II-V 时相的卵母细胞，80% 以上体积被V 时相卵母细胞所占据，与斑马鱼为典型 的非同步型卵巢相适应；II 时相卵母细胞染色为深紫色，III 时相卵母细胞开始出现放射膜， IV 时相卵母细胞卵黄迅速堆积，V 时相成熟卵母细胞呈游离状态、细胞核消失。 利用乙醇浓度梯度为0 ml/L （对照）、0.50 ml/L、1.00 ml/L、2.00 ml/L 、4.00 ml/L 、8.00 ml/L 的溶液孵化受精卵及饲养稚鱼5 d，得到受精卵孵化率分别为61%、59.5%、55%、40% 、 17.5%、10%；稚鱼成活率分别为67.78 %、66.84 %、58.8 %、47.68 % 、20.2 % 、12.3 %，并 在4ml/L 以上组观察到独眼畸形、脊柱弯曲和死亡等现象。结果表明，0.50 ml/L 的乙醇浓度 对受精卵孵化率及稚鱼成活率与对照组差异不显著，因此小于等于0.50 ml/L 的乙醇溶液对斑 马鱼是安全剂量。大于此剂量的乙醇则对孵化率、存活率有明显影响。 利用浓度梯度为0mg/L （对照）、1.00 mg/L、2.50 mg/L 、5.00 mg/L、10.00 mg/L、20.00 mg/L 的甲基睾酮（MT ）溶液孵化受精卵及浸泡孵化后10d 的稚鱼40d ，孵化和饲养期间每3d 采 集孵化后12d 以上稚鱼固定切片观察性腺发育。结果显示，受精卵组的成活率分别为34.75%、 33%、31%、23% 、15.75%、9.75% ；雄性比分别为50.35%、56.89%、74.94%、93.61%、95.3%、 0 。稚鱼最晚于35 d 时可以区分性别，成活率分别为74.92%、66.60%、62.15%、41.74% 、24.39% 、 12.81%，雄性比率为49.61% 、58.17%、78.23%、92.89%、98.75%、0 。并随着激素浓度的增 高，各组体长、体重均有所降低。由此表明MT 对斑马鱼的生长活力和成活率都有明显的抑 制作用；当MT 剂量达到10mg/L 处理鱼卵和稚鱼均会出现少量的不育个体，20 mg/L 的MT 为可诱导群体不育，利用MT 浸泡法对斑马鱼进行全雄控制的剂量应在5~10mg/L 之间。 利用含MT0mg/kg （对照）、30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg、240 mg/kg 、400 mg/kg 的 饲料饲喂60 日龄及经产雌性斑马鱼30 d，并于饲喂后进行测交。结果显示，60 日龄组成活 率分别为95%、90%、75%、55%、35%、70% ，成熟度分别为0.1074、0.0998、0.0756、0.0582、 0.0386、0.0278 ；经产组成活率分别为100%、95%、80%、55%、40% 、65%，成熟度分别为 0.2247 、0.1905 、0.1531 、0.1210 、0.0275 、0.0407 。随着激素剂量的增加，斑马鱼的生长受 到明显的抑制，但在400 mg/kg 组有明显回升。MT 对雌性斑马鱼产卵量、受精卵孵化率、 生长活力、成活率及成熟度都有明显的抑制作用；400 mg/kg 处理雌性斑马鱼30 d 可产生激 素阉割。 经产雌性斑马鱼性腺切片观察结果表明：随着MT 剂量的增加，各剂量组性腺的发育受 到的抑制加深，卵巢结构变化也明显。30 mg/kg 组V 时相成熟卵母细胞数量减少；60 mg/kg 组II 时相以上卵母细胞所占面积减少为60%，120 mg/kg 组开始观测到明显的卵母细胞退化