家蚕近交系遗传测及其方法的研究.pdfVIP

摘要 家蚕近交系遗传检测及其方法的研究 特种经济动物饲养专业硕士研究生 谭端 指导教师：代方银副教授 鲁成教授 摘 要 家蚕(BD研6炻mD一)是重要的经济昆虫，用作实验遗传动物的历史已达百年。其遗传背景 清楚，各种突变性状丰富，而且具有体型小、繁殖周期短、繁殖系数高、易饲养等特点，具 备实验动物的遗传特性。采用高度近交的动物可减少实验动物数量和实验重复次数，提高实 验结果的准确性、可比性和可重复性。近交系实验动物的显著特点是其基因纯合性及遗传稳 定性，但在培育、保种及繁殖生产过程中，存在着发生遗传变异或遗传污染的可能，所以需 要对近交系进行严格、定时的遗传检测。对于家蚕，以培育理想的实验动物为目的的高度近 交系研究，目前还处于起步阶段，因此近交系的遗传检测也是近交系培育工作的需要。有关 实验动物的国家标准规定了利用皮肤移植法、免疫标记基因检测法和生化基因标记检测法等 进行常规检测。近年来分子生物学技术发展迅速，可以直接检验动物基因组核酸的改变，为 家蚕近交系的遗传检测提供了直接、客观的途径。 及28个同源导入近交系进行了遗传纯度的检测，期望能探索并初步建立家蚕近交系遗传纯度 检测的技术体系，为家蚕实验动物化、模式生物化等相关研究奠定基础。主要结果如下： 1、家蚕近交系BlllIs．c108的凡APD检测 以培育系的亲本19．100为对照品系，利用28条随机引物，采用RAJPD．PCR技术对家蚕 个个体进行了遗传纯度检测。28条引物在IS．C108的3个蛾区中分别扩增出183条、182条、 182条带，其中多态性条带分别为7条、5条、5条，多态性带频率分别为3．825％、2．747％、 I 两南人学硕十学付论文 蛾区内的遗传纯度为0，8994。 2、家蚕近交系BmIS—C108的ssR检测 对上述实验材料采用SsR—PCR技术进行遗传检测，所使用的28对ssR引物分别属于家 多态性条带均为l条，多态性带频率也均为1．639％；在亲本19一100中扩增出73条带，其中 多态性条带为5条，多态性带频率为6．849％。在品系间，IS．C108蛾区间的多态性频率仅为 均等位基因数、平均观测杂合度、平均期望杂合度和Hardy．wbinbe唱平衡偏离指数都分别为 交系的3个蛾区的H砌y．w色inbcrg平衡偏离指数(D)都为0，结果表明该近交系的基因型的分 0．9986，亲本19．100蛾区内的遗传纯度为0．9185。 3、家蚕近交系BlIlIs．Dazao的SSR检测 30个个体进行了遗传纯度检测。20对引物在IS—Daz∞的3个蛾区中均扩增出5l条带，其中 多态性条带均为l条，多态性频率也均为1．961％：在亲本19．200中扩增出52条带，多态性 3个蛾区个体问的多态性频率为 条带为2条，多态性带频率为3．846％。在品系间，Is．D锄o 3．846％，与亲本19．200多态性带频率(3．846％)相当。IS—D配a03个蛾区的平均等位基因数、 平均观测杂合度、平均期望杂合度、H莉y．weinbe曙平衡偏离指数均分别为2．550、0．020、 均等位基因数、平均观测杂合度、平均期望杂合度均、Hardy—Wreh她喀平衡偏离指数、遗传 基因型分布处于平衡状态，Is．D配∞的遗传纯度较高，平均为99．91％。 4、家蚕同源导入近交系的SSR检测 采用SSR．PCR技术对家蚕28个同源导入近交系进行了遗传检测，所使用的28对SSR 引物分别属于家蚕SSR标记连锁图的28个连锁群。得到28个同源导入近交系的遗传相似系 数均为100％。结果表明，经20代以上的回交，除目的基因外，均为轮回亲本的遗传组成。 对其中的大造x进行了个体DNA的基因型分析，检测群体遗传纯度，实验值为100％，说明 同源导入近交系的遗传纯度很高。 5、两种分子标记技术对同一近交系进行遗传检测的比较 本研究同时采用凡廿D、SSR分子标记技术对家蚕20代全同胞近交系IS．C108进行了遗 II