小尾寒羊5个与殖和疾病抗性相关基因的克隆及比较基因组学分析.pdf

摘要 绵羊作为世界上重要的可再生资源，在农业生产中占有重要的地位。在鸡、牛和猪已经完成 初步的基因组测序的情况下，绵羊基因组的研究现状呈现明显的滞后状态。基于比较基因组学的 研究手段，在基因组图谱和测序的基础上，利用模式生物基因组研究中获得的信息推测畜禽品种 中的基因数目、位置、功能、表达机理和物种进化，可以实现对畜禽品种重要经济性状候选基因 的鉴定、克隆和特性的认识。本课题尝试在中国地方绵羊品种的功能基因组研究中引入比较基因 组的研究方法，进行缔羊繁殖和疾病抗性相关基因的克隆，为中国地方绵羊的选育和品种资源保 护提供理论依据．并用以指导绵羊品种的分子育种和品种资源的保护工作。 本实验共克隆了绵羊YB．j、绵羊和山羊ISGl5、TLR9、MSY2和C1815个基因，并对各个基 因进行了比较基因组学分析．结果如下： 个氨基酸．该蛋白具有典型的CSD结构域，氨基酸序列与人、犬、小鼠、大鼠、黑猩猩、恒河 船．J基因转录表达调控的复杂性与物种进化复杂程度可能存在一定的相关性。43个物种YB—l及 其直向同源物蛋白的聚类与生物进化的方向基本一致。并且蛋白的3-D结构也同样保守，但各物 种IB-I的非翻译区在基因调控及表达中发挥了不同作用，从而在进化方向上存在一定差异。 建立了高效的绵羊晒一』原核表达体系，为进一步获得抗血清并应用到YB．1蛋白功能研究奠 定了基础。 小尾寒羊睾丸和卵巢中共克隆了75个非冗余的YB-1选择性剪接产物克隆，其中卵巢组织中 26个，睾丸组织中49个，涵盖了5’端或3’端的选择性剪接、外显子跳跃及内含子保留等3 在85％的一致性。第六组序列为卵巢中的l条选择性剪接方式．功能未知。绵羊YB-1基因在不 似的“茎泡”样结构，并随着序列碱基数目增加在主茎环结构外也增加了其他茎环结构，使整体 的二级结构呈现“十字”型变化。 小尾寒羊和济宁青山羊1SGl5 蛋白均存在2个泛素同源结构域．并且其3．D结构也显示出较高的相似性。已克隆的小尾寒羊序列 存在Leu-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly(LRLRGG)序列。 绵羊基因组中TLR9以单拷贝形式出现，基因克隆产物长4192 bp，包括115 蛋白功能域在数量、种类及相对位置上均有不同，因而造成恒河猴和小鼠在多物种TLR9蛋白功 能域聚类分析与基因的系统进化树的聚类的位置上存在差异。 绵羊基因组dPMSY2以单拷贝形式出现，基因克隆产物长4927 bp，包括外显子2~8和493 bp的 控中发挥重要作用。 皋丸eDNA扩增产物799 与其他物种的CIBl 构域，与其他物种的相似性分别为，牛97％，犬和恒河猴87％，人88％，大鼠和小鼠85％。 关键词 绵羊比较基因组学繁殖性状相关基因疾病抗性相关基因基因克隆】B，^，G TLR9MSY2CIBl II Abstract Asan renewableresourceinthe holdsthe stationin important world，sheepimportant case ofThe and GenomeInitial production．In Human，Chicken，CowPig Sequencingalreadyhaving been researchon obvious status．Based completed，the sheepgenomepresents laggard ontoolsof