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抗咪唑乙烟酸除剂t--1菌株的基因筛选与表达分析
目录 YIII12III16II2IIIIllU1III3III嶝
中文摘要…………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………．III
1前言……………………………………………………………………………………………1
1．1咪唑乙烟酸及其作用机理………………………………………………………………一2
1．1．1眯唑乙烟酸的结构及理化性质………………………………………………………2
1．1．2咪唑乙烟酸的使用现状及作用原理…………………………………………………2
1．1．3咪唑乙烟酸的代谢与降解……………………………………………………………3
1．2除草剂污染土壤的生物修复……………………………………………………………．．4
1．3细菌基因组文库的研究现状……………………………………………………………．．7
1．3．1基因文库构建的研究…………………………………………………………………7
1．3．2细菌基因组文库的研究………………………………………………………………7
1．4本研究的目的和意义……………………………………………………………………．．8
1．5本研究技术路线…………………………………………………………………………一9
2材料与方法…………………………………………………………………………………．10
2．1实验材料…………………………………………………………………………………10
2．1．1供试菌株与载体……………………………………………………………………．10
2．1．2供试除草剂…………………………………………………………………………10
2．1．3供试培养基配制方法………………………………………………………………．10
2．1．4常用试剂配制方法…………………………………………………………………．10
2．1．5限制性内切酶、试剂盒及试剂耗材………………………………………………．．10
2．1．6引物……………………………………………………………………………………………………………．1l
2．1．7主要仪器与设备……………………………………………………………………．11
2．2
T．1菌株的鉴定及生长条件的测定………………………………………………………11
2．2．1T．1菌落形态观察……………………………………………………………………11
2．2．216S
rDNA的序列测定………………………………………………………………11
2．2．3系统进化树的构建…………………………………………………………………．14
2．2．4菌株T-1生长条件的测定…………………………………………………………．．14
2．3菌株T．1的基因组文库构建……………………………………………………………．15
2．3．1T-1总DNA的提取…………………………………………………………………．15
2．3．2
T．1菌株文库的构建及鉴定…………………………………………………………15
2．3．3抗咪唑乙烟酸候选基因的筛选……………………………………………………．．17
2．3．4候选基因的序列分析………………………………………………………………．18
2．4候选基因的原核表达研究………………………………………………………………18
2．4．1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达………………………………………………．．18
I
东北农业大学农学硕士学位论文
2．4．2重组质粒的功能验证………………………………………………………………．18
2．5候选基因的生物信息学分析……………………………………………………………19
2．5．1候选基因编码的氨基酸功能预测…………………………………………………．．19
2．5．2候选基因编码氨基酸序列高级结构预测…………………………………………．．19
3结果与分析…………………………………………………………………………………．20
3．1T．1菌株最佳生长条件的测定与鉴定…………
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