家蚕生长发育调网络中若干基因的克隆和分析.pdfVIP

中文摘要 昆虫的蜕皮和变态是由保幼激素和蜕皮激素进行调控的。同时，蜕皮激素对昆虫的 生长，发育和繁殖等都具有重要作用。昆虫体内蜕皮激素的生理平衡主要是依靠其生物 合成和降解。在大多数昆虫的幼虫阶段，前胸腺是蜕皮激素的主要来源，其主要成分是 随着比率不断变化的ecdysone。 昆虫体内蜕皮激素水平的降低主要是由于蜕皮激素的灭活和排泄造成的。蜕皮激素 acid，(2)形成 oxidase的催化下 不同种类的共轭化合物(如：磷酸盐)，(3)鳞翅目昆虫中，在ecdysone 形成磷酸盐共轭化合物。在最后一个途径中，主要有3个酶参与了该反应，分别是 oxidase，3DE3a-reductase和3DE ecdysone 3D—reductase。 oxidase是蜕皮激素灭活途径中一个关键的酶。本研究中，我们克隆并鉴 Ecdysone 定了家蚕ecdysone bp的ORF， 编码564个氨基酸残基，预测蛋白质分子质量为62kDa，等电点为4．6，属于 Glucose—methan01．cholineoxidoreductase 含有一个Glucose．methan01．choline real．timePCR的方法比较了BmEO基因在家蚕各组织中的表达水平发现该基因主要是 在血液中表达。家蚕幼虫发育过程中BmEO的表达水平变化与幼虫体内蜕皮激素的滴度 变化相对应。给家蚕幼虫添食蜕皮激素可以诱导其表达。对BmEO的RNAi可以使其表 达量下降，减少这个酶可能会引起蜕皮激素滴度的增加。表型观察结果显示可以导致实 验组的幼虫和蛹的死亡，并且表型与注射蜕皮激素的对照相似。可见该基因在昆虫变态 发育中的重要作用。 3DE 3ct．reductase基因。3DE3a．reductase基因的eDNA包含一个783 bp的ORF，编码260 个氨基酸残基，预测蛋白质分子质量为28 domain，推测其功能 dehydrogenases／reductasessuperfamily，并且有一个NAD(P)．binding real．timePCR的方法比较了3DE 需要NADPH的存在。用RT-PCR和Quantitative 3a．rcductase基因在家蚕各组织中的表达水平发现该基因主要是在中肠和血液中表达。 IV 家蚕幼虫发育过程中3DE 相对应，该结果与BmEO的变化相似。 3DE 3B．reduetase基因。3DE3p—reduetase基因的eDNA包含一个972 bp的ORF，编码323 domain，推测其功能也需 要NADPH的存在。这点和3DE real．time PCR的方法比较了3DE 在生殖器和脂肪体中表达。家蚕幼虫发育过程中3DE 虫体内蜕皮激素的滴度变化是一个相反的情况，由于其反应是一个逆反应，因此该结果 与BmEO和3DE3a．reduetase的变化相反。 hormone JH的生理平衡取决于其合成和降解代谢。Ⅲ酯酶(Juvenile esterase，JHE)， Ⅲ环氧化物酶(Juvenilehormon