沙葱黄酮提取工优化、结构鉴定及其相关生物活性研究.pdfVIP

!IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlUlII)IIMllllll11111l 本试验由国家自然科学基金与国家科技支撑计 3BADl 划课题(201 OB04)资助 摘 要 沙葱广泛生长于我国西北荒漠化草原且所含营养物质丰富，且所含有营养物 质丰富，拥有其独特的天然生物活性。而沙葱黄酮作为其天然活性成分之一，目 前与其相关的研究报道较少。为使沙葱活性成分能够得到全面的研究与开发，本 研究旨在建立一套得率较高、活性较好的沙葱黄酮提取工艺、并结合相关试验确 定其抗氧化、抗菌活性及对绵羊外周血淋巴细胞免疫功能的影响作用，为沙葱有 效成分的进一步研究和沙葱相关保健产品及饲料添加剂的开发与利用提供依据。 本试验所得结果如下： (1)在单因素试验基础上，采用响应面法对超声波和酶解法提取沙葱总黄酮 的工艺进行优化，得出超声波法提取沙葱总黄酮的最佳提取工艺参数为：提取时 黄酮得率为12．85+0．03mg／g。纤维素酶解法提取沙葱总黄酮的最佳提取工艺参数 为：0．Ig脱脂脱色沙葱粉末中添加4．5mg纤维素酶，温度39℃，体系pH值为 4．3，乙醇浓度为75％，料液比l：509／mE，提取时间4h，此条件下沙葱总黄酮得 率为5．48+0．02mg／g。 (2)比较两种方法提取所得沙葱总黄酮的体外抗氧化、抗菌及对绵羊外周血 淋巴细胞免疫功能的影响作用。结果显示，沙葱总黄酮具有一定的体外抗氧化活 性，相同浓度条件下超声法提取所得沙葱总黄酮的总还原能力及体外清除DPPH 有机自由基的能力强于酶解法提取所得沙葱总黄酮，酶解法所得沙葱总黄酮清除 羟基自由基的能力高于超声波提取法所得沙葱总黄酮。沙葱总黄酮对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌的抑制作用不敏感，对沙门氏菌的抑制作用为低度敏感，对绿脓 杆菌没有抑制作用，并且两种提取方法所得沙葱总黄酮的抑菌作用无明显差别。 两种提取方法所得沙葱总黄酮均能够促进绵羊外周血淋巴细胞增殖，上调绵羊外 表达水平，且超声法提取所得沙葱总黄酮效果优于酶解法提取所得沙葱总黄酮。 (3)对超声波提取所得沙葱总黄酮使用聚酰胺柱层析进行梯度洗脱，分别得 到蒸馏水、35％、55％、75％乙醇洗脱组分，并分别对各组分进行红外、紫外光 谱检测及液质联用检测。综合三种检测结果分析得出，蒸馏水洗脱成分含有大量 的单糖，35％乙醇洗脱组分除含有单糖外可能含有3。，4t．环氧基．7．O．5．甲氧基黄酮 醇与7一O．5,4。．二甲氧基一3。．羟基黄酮。55％乙醇洗脱组分中含有糖类、芦丁、木犀 草素．5’．O．葡萄糖．4．羟基苯丙酸、异槲皮苷。75％乙醇洗脱组分中含有糖类、金 合欢素及黄酮类物质。 (4)对沙葱总黄酮不同洗脱组分的体外抗氧化、抗菌及对绵羊外周血淋巴细 胞的免疫调节作用进行研究。结果显示沙葱总黄酮中35％乙醇洗脱组的抗氧化与 免疫调节活性最强，其所含的3’，4’．环氧基．7．O．5．甲氧基黄酮醇与7-0-5，4’一二甲 氧基．3。．羟基黄酮的活性结构是其抗氧化活性的关键基团，而其所含的C2-C3双 键结构是其调节免疫活性的关键结构组分。而在沙葱总黄酮中起到抗菌活性的关 键部位是55％乙醇洗脱组成分，这不仅与其结构组分中含有电荷密度较高的 (24--0、CrOH和C7．OH结构有关也与其连接有单糖或含有苷元的结构有关。 关键词：沙葱黄酮；提取工艺；结构鉴定；抗氧化活性；抗菌活性；免疫调节 活性 StudiesonExtraction and Identification Process，Structural Related ofAllium BiologicalActivity MongolicumRegel Flavonoids Abstract