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紫花苜蓿褐斑病性基因分子标记研究
摘 要
本研究对前人筛选的分子标记的准确性和通用性进行了鉴定并建立一套快速准确对苜蓿褐斑
病抗性鉴定和遗传资源筛选的技术体系，提高抗病检测效率，为抗病基因的克隆和遗传图谱的建
立提供了可靠性高的标记位点，为苜蓿抗褐斑病标记辅助选择育种以及抗褐斑病基因的定位、克
隆奠定基础，对苜蓿抗褐斑病种质资源的高效筛选利用和苜蓿抗病育种研究有重要意义。本项研
究得到的主要结果如下：
选取4个具有不同遗传背景的紫花苜蓿品种为研究材料，先通过人工接种试验，根据病情指
属丁：高抗品种，新疆大叶、中苜一号和龙牧801属于中抗品种，龙牧801的抗病性最低。在4个
株的抗病性与4个品种的总体抗病性基本相符。
苜蓿褐斑病的可靠指标。本研究结果不仅为将上述标记转化为SCAR标记奠定了基础，而且为抗
病基因的克隆和遗传图谱的建立提供了可靠性高的标记位点。
建立抗、感DNA池，通过优化紫花苜蓿(I[edicago
1
Buffer(Mg+Plus p．M)0．25)上M，模
板DNA(10ng／I．tL)20ng，Taq酶(TaKaRa，5U／I,tL)0．8U，ddH209．24pL。采用梯度PCR确定退火
在通用性高和中等的与苜蓿褐斑病连锁的标记的基础上，设计了53对SCAR引物，其中
ALSR834S--4、ALSR
共7个SCAR标记转化成功，占13．21％。
设计的3个SCAR．SRAP标记在抗、感单株间均扩出条带，多态性消失。将3个标记的抗、
感单株的PCR产物分别进行纯化、克隆、测序，结果发现抗病基因中均存在一个TaqI酶切位点，
而感病基因中不存在此位点，成功将SRAP对应的SCAR标记转化为CAPS标记。
关键词：苜蓿，褐斑病，ISSR标记，AFLP标记，SRAP标记，SCAR标记，CAPS标记
Abstract
We SRAP selected with
and
ISSR,AFLPmarkers，whichbypredecessors．Markershi【gh
verify
to
and willbeselected．Webuild to theresistance
accuracy technologysystemidentify
applicability
common callalsosc代，en resourcesthatwillincreasethedetection
leaf disease．which genetic
spot
marker-site and
resultsofthis willnot high to maps
efficiency．The study onlyprovidereliability genetic
alsothefoundationforCommonLeaf DiseaseResistance and
genescloning，butlay Spot genemapping
markers to andmarker-assistedselectofmolecular
SCARand(-气PS c彻beused
cloning．The identify
thatlinkedto tothecommonleaf of alsoincreasethe of
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