绒山羊绒毛周期关microrna及其靶基因的研究.pdf

本研究由 “国家“863”计划项目”(编号：2007AAl02151) 1 BAD28805) 十二五“国家科技支撑”计划(编号：201 和 “国家自然科学基金项目”(编号资助 Thisworkwas from supportedbygrants 5 National“863”of 021 China(No．2007AAl1) and Plan”ofChina ¨NationalScience TechnologySupport (No．2011BAD28805) and of NationalNaturalScienceFoundationChina (No 摘 要 内蒙古绒山羊是自治区地方优质资源品种，绒毛生产性能是内蒙古绒山羊的重要经 济性状。影响绒毛生长的因素有很多，而褪黑激素、miRNA是其中两个非常重要的因素。 近年来，关于褪黑激素影响绒山羊绒毛生长的研究发现，持续埋植褪黑素可促进羊绒提 前进入生长期，诱发2次生绒并在分子水平改变了很多绒毛生长相关基因的表达，而对 于miRNA这一重要毛发生长调控因子的研究未见详细报道。因此，本研究以miRNA为介 源褪黑激素、miRNA及其靶基因的关系，进一步从分子水平上的解析褪黑激素促进绒毛 生长的机理，为提高绒毛产量和品质提供理论依据。 主要研究结果如下： 1、microRNA靶基因指纹图谱(MTFP)方法的建立 建立了一种实验性获得miRNA靶基因的新方法(microRNATargetsFinger 基因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中检测其片段大小和表达丰度，用于筛选在不同生理状态或 试验条件下特异表达的基因；特定的靶基因序列通过DNA回收和测序方法得到。以 miR一203为例，在不同生理状态的山羊皮肤样品中获得了5条大小分别为718bp 来评估靶基因的表达谱特征。 2、褪黑激素影响miRNA及其靶基因的研究 埋植褪黑激素明显改变了6个绒毛相关miRNA的表达规律。一个绒毛周期内，除 高水平后急剧下降，并于2月、6月又出现两个小的表达高峰；miR-205表达规律与其 余5个miRNA基本一致，一个绒毛周期内也出现3个表达高峰，全年表达量最高值出现 全年内在10月、12月、2月虽然也出现了三个峰值，但除了10月达到全年最高水平外， 其余两个峰值波动不明显；miR一183埋植褪黑激素后全年处于较低水平。 埋植褪黑激素改变了miRNA之问的共表达模式。对照组各miRNA之问相关系数范围 miR-205，miR一203与miR一96、miR一199a, 之间的相似性被明显消弱。 MTFP并未检测到埋植前后特异条带的分布，但定性的分析了候选miRNA的靶基因。 3、埋植组与对照组10月皮肤组织转录组文库构建及测序分析 在构建内蒙古绒山羊iO月皮肤埋植组与对照组转录组文库的基础上进行了 i 大于300bp的contgs52，33 1条。通过CLCgenomi fol 1 至0 d_change(MT．1o，c-lo)74、Q-valueO．001或fol 通路分析，上调基因富集到发育相关的16条通