绵羊yap1基与肌肉生长相关基因表达相关分析以及载体构建的研究.pdfVIP

绵羊YAPl基因与肌肉生长相关基因表达相关分析以及 载体构建的研究 Y241 研究生：李达 9砷1 导师：孙伟副教授 专业：动物遗传育种与繁殖 (扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009) 摘要 本实验以湖羊为研究对象，利用基因克隆技术克隆绵羊YAPl基因eDNA全长序列， 并利用生物学分析软件对绵羊YAPl基因与其他物种的同源性，其蛋白的理化性质，二级 结构和三级结构进行了生物信息学分析；利用荧光定量PCR技术对绵羊YAPl基因在出 生后二日龄，二月龄和六月龄不同公母在四种不同骨骼肌(背最长肌、比目鱼肌、腓肠肌、 趾长伸肌)的相对表达进行了分析；并利用RT-PCR、载体构建和定点突变技术，构建了 pEGFP．C1．YAP YAPl在绵羊出生前和出生后肌肉生长过程中的调控机制，为湖羊肌肉生长性状的选育提 供遗传学资料。本研究获得了一下结果： 7 712 212 UTR 1．克隆获得绵羊YAPl基因序列全长为1 bp，其中包括编码区1 bp，5 UTR 27bp和3 与推测的氨基酸序列与灰仓鼠的同源性最高，分别达到78．77％和92．51％，而与人、黑猩 猩的一致性差异较小。氨基酸序列分析得到，绵羊YAPl基因编码蛋白为水溶性蛋白，相 细胞核，不属于分泌蛋白；预测含有33个磷酸化位点，7个糖基化位点，具有两个WW 结构域，二级结构以无规则卷曲为主，三级结构显示，YAPl结构域区构成弯曲状螺旋结 构。预测YAPl蛋白主要在调节功能过程中有着关键作用。 2．绵羊YAPl基因在不同肌肉中的表达存在显著差异，其中在腓肠肌中相对表达最高， 在背最长肌中最低，在不同生长阶段(二日龄、二月龄和六月龄)的比较中，YAPl的表 I、II A、II I呈极显著负 X)、MSTN、MyoG的表达关联性分析表明，YAPl与MyHC II 相关，与MyHC 育有关联，可能参与了肌球蛋白重链基因的相互转化，并可能成为调节肌肉生长的候选基 因。 1-YAP 3．重组质粒pEGFP—C1经PCR、酶切、测序鉴定，证实YAP1基因CDS区已 正确克隆入pEGFP—C1表达载体；经测序鉴定，YAPl第42位丝氨酸成功突变为丙氨酸。 本研究为探索YAPl在成肌细胞增殖和分化过程中的调节机制奠定了实验基础。 关键词：肌肉： YAPl；基因克隆； 表达； 载体构建 II on Research correlationbetween expression analysis sheep YAP1andother relatedwithmuscle andthe genes growth 1 constructionofYAP vector eukaryoticexpression Da