绵羊羊水来源多能干细胞生物学特性研究.pdfVIP

摘 要 fluid—derived 近年来，在人和动物的羊水中发现一类多潜能干细胞(Amniotic stem Stem Cell StemCel s，ESCs)和成体干细胞(Somaticl，SSC)的标志基因，体外悬浮培养 能形成类胚体，因此，羊水来源干细胞被认为具有发育全能性并在体内可能发挥极其 重要的生理功能。 本试验研究中，采用两种不同的分离培养方法共从绵羊羊水以及胎儿肾组织中成 功分离培养3株表达Oct4和SSEA一1多潜能干细胞。采用干细胞通用分离培养方法，以 鼠胚胎干细胞培养液成功分离培养一株羊水来源多潜能干细胞(AFSC)，AFSC表达主 要组织相容性抗原(majorhistocompatibilitygene，瑚C)MHC—I不表达HHC—II， 称之为AFSC-I。在此基础上，通过调整培养液组成，采用低浓度胰酶培养液培养，从 同一受孕中期绵羊的羊水和胎儿肾组织中分别分离培养1株多潜能干细胞。其中，羊 renaltissue stem 细胞(The pluripotent I。 称之为RTSC—I cel 细胞(Primordial germ stem time IVB-IC-II。Real 约为1．3。AFSC-I、AFSC—II署HRTSC—I I体外悬浮培养7d后均能形成类胚体。RT-PCR检 体核型检测正常率分别为94％、88％、90％。非正常核型为染色体数目发生倍增。 以携带有强启动子CMV韵P time AFSC-II和RTSC-II体外悬浮培养7d均能形成类胚体。RealPCR分析，结果显 示转基因AFSC—II和RTSC—II均表达Oct-4、 I在转染后，相对表达量分析显示， SSEA一1的表达量 MHC-I、Nanog以及Tert。AFSC—I 相对表达量分析显示， Oct-4的表达量显著增加，其相对表达量为转染前的13倍， 研究结果显示，绵羊羊水干细胞的生物学特性与胚胎干细胞类似，但是又有别于 胚胎干细胞。同时，体内机体组织中有与羊水干细胞类似细胞存在意味着羊水干细胞 有可能在人与动物的机体组织中扮演着重要的角色。因此，对羊水干细胞的生物学特 性进行深入系统研究具有重要的理论和实践意义。 关键词：羊水干细胞；肾组织多潜能干细胞；0．01％胰酶培养液；类胚体；多潜能细 胞；干细胞分化：干细胞凋亡 The CharacteristicsofAmnioticFluid—Derived Biological Study StemCellsfrom Sheep Abstract foundintheamnioficfluidofhumansandanimalsinrecent Aclassofstemcellswas stem without cells amnioticfluid—derived years．The celIs(AFSC)Cangrow cytotrophoblast and themarkerof stem somaticstem express geneembryo