实验三细胞器及细胞骨架的观察要点.pptVIP

实验三 细胞器及细胞骨架的观察 作业： 1、绘脊神经节细胞图，并注明部位名称 2、绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图 作业： 绘人口腔黏膜上皮细胞图和藻叶细胞图 * * 一、实验原理 （一）细胞器的观察 光学显微镜由于分辨率较低，一般用于观察细胞的结构。细胞器的结构主要在电子显微镜下观察，称为细胞的亚微结构。有一些特殊细胞内的部分细胞器，可以直接在光镜下观察到（如叶绿体)，有些通过特殊组织化学或组织免疫化学染色，能清晰的在光镜下显示。 （二）细胞骨架的观察 细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。当用适当浓度的TritonX-100处理细胞后，可破坏细胞膜和细胞内的蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好，经戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到细胞内一种以微丝为主的网状结构，即是细胞骨架。 二、实验目的 1、观察动植物的各种细胞器。通过特殊组织化学或组织免疫化学染色，了解细胞器结构。 2、了解洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布 3、能正确的绘图，并记录观察结果，并能理解每个实验步骤的意义 三、实验材料及仪器 (1)器材：光学显微镜、解剖镊、解剖针、手术剪、载玻片、盖玻片、吸管、吸水纸、擦镜纸、小平皿、恒温培养箱、、1ml取液器、染色缸 。 (2)材料：洋葱鳞叶、脊神经节切片、小白鼠十二指肠横切片。 (3) 试剂：PBS缓冲液（PH=7.2）、1% TritonX-100、M-缓冲液、3.0%戊二醛、0.2%考马斯亮蓝R250 三、方法与步骤 1、细胞器的观察 2）高尔基复合体的观察 取脊神经节切片，置低倍镜下观察，可见到许多呈椭圆形或不规则形状的淡黄色神经细胞。选神经细胞较为集中的区域，换高倍镜观察，可以看到大小不等的神经细胞（但这些细胞不是排列在同一平面上)，有的细胞中央有一染色很浅或几乎无色的圆形泡状的细胞核，有的细胞核内可见到被染成橙黄色的核仁。在细胞核周围的细胞质中，有被染成深褐色呈弯曲的线状、粒状或网状的结构，即高尔基复合体。 3）中心体的观察 取马蛔虫子宫切片，在低倍镜下寻找其受精卵分裂中期的细胞，然后换高倍镜观察，可见中期细胞中央有深蓝色条状的结构，这就是染色体。在染色体两侧，各有一深蓝色的圆形小粒，即中心粒。在中心粒周围的致密物质叫做中心球。中心粒和中心球构成中心体，在中心体周围还可看到许多纤细的、呈辐射状分布的星射线。中心体和星射线合称星体。有时因切面的关系，中心体仅出现在一侧或两侧均无（该过程由教师示教) 4）线粒体的观察 取小白鼠十二指肠横切片，在低倍镜下观察，可见肠管内壁向肠腔中突出，形成许多指状的皱襞。换高倍镜观察，可见这些皱襞是由许多界限不清楚的柱状细胞（肠上皮细胞）构成。再换油镜观察，可见在柱状细胞中央有一椭圆形的细胞核，在其两端的细胞质中有许多蓝色的线状或颗粒状结构，即为线粒体 2、细胞骨架的观察 1、用镊子撕取洋葱鳞叶内表皮若干片约lcm2大小，放入小烧杯或小培养皿中，用磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.2) 洗3 次，每次约0.5 min。 2、吸去PBS，用1％TritonX-100，37℃处理洋葱表皮20～30 min. 3、除去TritonX-100，用M-冲液充分洗3次，每次约2 min，以使细胞骨架的稳定。 4、 加3.0％戊二醛固定10 min。 5、 弃固定液，用PBS洗3次，每次约1 min，滤纸吸去残留液体。 6、 0.2%考马斯亮蓝R250染色10~15 min。 7、用清水冲洗数遍，降低背景。 8、将样品置于载玻片上，加盖玻片（也可不加)，制成 临时制片. 9、在光学显微镜下观察。 洋葱细胞的细胞骨架图 Х40 洋葱细胞的细胞骨架图 Х40 洋葱细胞的细胞骨架图 Х10 一、叶绿体的观察 1、用镊子取新鲜水藻嫩叶1 片，放在载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片。 2、在低倍镜下观察，可见藻叶细胞与洋葱鳞叶表皮细胞相似，亦呈长方形。在细胞内有许多略呈椭圆形的绿色小体，称为叶绿体 实验三 细胞器与细胞骨架的观察 *