实验一培养基的制备消毒与灭菌及超净工作台的使用要点.pptVIP

微生物实验课注意事项 课程简介：必修课，24学时 考试成绩按以下公式计算： 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（3次） 不能做与实验无关的事 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 三、超净工作台的使用方法 工作原理：相对无菌的隔离小环境 使用方法和步骤： 紫外线的效用和紫外灯的使用方法； 照明系统的效用使用方法； 酒精灯的效用和使用方法。 维护常识：酒精擦理 实验报告与问题讨论 本次实验课结束请第一组同学做好值日下周再见！ * * * 微生物学实验 平时（60％）＋操作考试（40％） 卫生 每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁 1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法步骤。 实验目的 一、培养基的配制 培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。 实验原理 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。 实验原理 常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 实验分组安排 5-6人一组，配制牛肉膏蛋白胨固体培养基 每组配 500 mL牛肉膏蛋白胨固体培养基?斜面1支（每人），其余分装在两个500 mL三角瓶。 包扎： ◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。 ◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。 ◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。 灭菌时包牛皮纸、报纸 灭菌： ◇ 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌 ◇ 通常灭菌条件为1.05 kg/cm2, 121℃灭菌20-30分钟；含糖量高的培养基，如马丁氏培养基则为0.56 kg/cm2,115℃灭菌30分钟。 二、消毒与灭菌 紫外线灭菌---- 紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用，其中以265-266 nm杀菌力最强。 无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。 干热灭菌 电烤箱 1、干热灭菌 2、压力蒸汽灭菌 干热灭菌 1、装入待灭菌物品 2、升温：接通电源，加热升温至160-170℃。 3、恒温：保持160-170℃ 2小时。 4、降温：切断电源，自然降温。 5、开箱取物：待烤箱温度降到70℃以下以后，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于70℃，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。 1、培养基配制的原理、方法、步骤及注意事项。 2、干热灭菌、压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤 3、思考题 1）培养基应具备哪些条件？为什么？ 2）在配制培养基过程中应注意哪些问题？为什么？ 3）培养基配制好后，为什么要立即灭菌？如何检查灭菌是否彻底？ 4）压力蒸汽灭菌时，为什么要将锅内冷空气排尽？ 5）灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？ *