产芽孢木质素降解菌MN-8的筛选及其对木质素的降解.pdfVIP

中国农业科学 20 14,47(2):324-333 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.02.012 产芽孢木质素降解菌MN-8 的筛选及其对木质素的降解 李红亚，李术娜，王树香，王 全，朱宝成 （河北农业大学生命科学学院，河北保定071000 ） 摘要：【目的】分离、筛选产芽孢的高效木质素降解细菌，并进一步研究其对木质素的降解作用，为木质素 微生物降解规模化应用提供理论依据。【方法】采用苯胺蓝 （Azure-B ）变色圈法，结合木质素降解酶活力测定从 牛粪中分离筛选出产芽孢的木质素降解菌。通过形态特征观察、生理生化试验、16S rDNA 以及gyrB 序列分析对 其中活性最强的菌株进行种属鉴定。利用菌株进行玉米秸秆堆积发酵，监测发酵过程中木质素过氧化物酶（LiP ） 酶活力、锰过氧化酶（MnP ）酶活力以及玉米秸秆中木质素含量的变化，考察菌株对玉米秸秆木质素的降解作用。 利用气相色谱-质谱联用（GC/MS ）方法对菌株发酵后玉米秸秆中的木质素降解产物进行分析，推测菌株对木质素 的降解机制。【结果】分离筛选到一株活性较高的产芽孢的木质素降解细菌 MN-8，经形态特征观察、生理生化试 验以及16S rDNA 序列分析，鉴定菌株MN-8 属于芽孢杆菌属（Bacillus ）。利用16S rDNA 序列分析发现MN-8 菌株 与地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）和解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens ）同源性均高于99%。 而基于gyrB 序列构建的系统发育树显示，该菌株与解淀粉芽孢杆菌同源性最高，为 99%。因此确定MN-8 菌株为 解淀粉芽孢杆菌。在玉米秸秆堆积发酵16 d 后木质素降解率可达24%；发酵的6—8 d 及10—12 d 两个阶段内， 分别出现MnP 酶活力及LiP 的产酶高峰期，相对应两个阶段内秸秆木质素的降解最为显著；GC/MS 分析显示菌株 MN-8 可将玉米秸秆中木质素降解成4-羟基-3,5 二甲氧基苯乙酮等芳香族类化合物及短链脂肪酸类等小分子物质。 【结论】高效木质素降解菌解淀粉芽孢杆菌MN-8 可以通过断裂木质素单体之间的连接键β-O-4，高效降解秸秆木 质素成为小分子芳香族化合物等物质，且其对秸秆木质素的降解依赖于LiP 及MnP 的产生。 关键词：木质素降解；芽孢杆菌；筛选；鉴定；降解特性 Screening, Identification of Lignin-Degradating Bacillus MN-8 and Its Characteristics in Degradation of Maize Straw Lignin LI Hong-ya, LI Shu-na, WANG Shu-xiang, WANG Quan, ZHU Bao-cheng (College of Life Sciences, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000, Hebei) Abstract : 【Objective 】The objective of this study is to obtain the Bacillus with the high lignin-degradation ability and investigate its characteristics in degradation of maize straw lignin, and to provide a basis for microbiological degradation of lignin. 【Method 】Bacillus with high ability for degrading lignin was isolated and screened from cattle manure by the decolorization