棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体表型特征和侧翼序列分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(3):489-496 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.03.007 棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体表型特征和侧翼序列分析 1 2 2 2 徐荣旗 ，汪佳妮 ，陈捷胤 ，戴小枫 1 2 （中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081 ； 中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081 ） 摘要：【目的】为鉴定棉花黄萎病菌随机插入突变体的表型特征，构建黄萎病菌遗传转化和功能基因研究的 技术平台。【方法】采用农杆菌介导的 T-DNA 插入和高效 TAIL-PCR 方法。【结果】获得了 2 628 个棉花黄萎病菌 VD991的T-DNA 随机插入的突变体和15个突变体插入位点的侧翼序列。部分突变体的表型特征和插入位点侧翼序 列分析表明，①突变体的菌落形态分为菌丝型、菌核型和中间型3类，菌核型约占7.3%；②在摇瓶培养条件下， 突变体产孢高峰在接种后第5—6天，菌核型突变体的产孢能力普遍高于菌丝型；③棉花黄萎病菌VD991可以产生 胞外蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶。筛选获得蛋白酶分泌缺失的突变体 3 个，淀粉酶分泌缺失的突变体 1 个，果胶酶分泌降低的突变体6个；④菌核型突变体的致病力普遍高于野生型。获得了6个致病力减弱的突变体； ⑤突变体侧翼序列与同种的大丽轮枝菌菌株 VDLs.17 基因组的序列一致性在 95%—100%之间，与不同种的黑白轮 枝菌VaMs.102 序列的一致性为87%—94%。【结论】农杆菌介导的T-DNA 随机插入可用于棉花黄萎病菌突变体的构 建，突变体微菌核的产生与其产孢能力、致病性存在相关关系。美国大丽轮枝菌菌株 VDLs.17 基因组可用作黄萎 病菌VD991功能基因研究的参考序列。 关键词：黄萎病菌；T-DNA插入；表型鉴定；侧翼序列分析 Analysis of T-DNA Insertional Flanking Sequence and Mutant Phenotypic Characteristics in Verticillium Dahliae 1 2 2 2 XU Rong-qi , WANG Jia-ni , CHEN Jie-yin , DAI Xiao-feng 1 2 ( Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100081; Crop Science Institute, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100081) Abstract: 【Objective 】 The objective of the experiment is to identify the phenotype characteristics of T-DNA insertional mutants and constructing a platform o