湖北海棠病程相关蛋白MhPR8基因的克隆与表达.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(8): 1568-1575 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.08.012 湖北海棠病程相关蛋白MhPR8 基因的克隆与表达 1,2 1 1, 3 1 2 1 张计育 ，渠慎春 ，薛华柏 ，高志红 ，郭忠仁 ，章 镇 1 2 3 （南京农业大学园艺学院， 南京 210095 ； 江苏省中国科学院植物研究所，南京 210014 ； 中国农业科学院郑州果树研究所，郑州 450009 ） 摘要：【目的】从湖北海棠叶片中克隆植物第Ⅲ类几丁质酶基因PR8 的cDNA 序列和基因组DNA 序列，研究化 学试剂SA、MeJA、ACC、ABA，非生物胁迫NaCl 和低温（4℃），生物胁迫苹果轮纹病病原菌和苹果蚜虫诱导下MhPR8 基因的表达特性。【方法】利用PCR 技术分别从SA 诱导的湖北海棠全长cDNA 文库和基因组DNA 中克隆MhPR8 基因 全长序列；利用生物信息学方法对其进行结构和功能的初步分析；利用实时荧光定量RT-PCR 技术分析该基因的表 达特性。【结果】该基因编码区为897 bp，编码298 个氨基酸，蛋白质分子量为31.67 kD，等电点为4.77，命名 为MhPR8。该基因在其编码区内部没有内含子。MhPR8 蛋白含有保守的结构域GH18_hevamine_XipI_class_III， 属于第III 类几丁质酶。该蛋白含有6 个保守的半胱氨基酸残基，含有植物第III 类几丁质酶起催化作用的天冬 氨酸和谷氨酸，分别位于第151 和153 位氨基酸。qRT-PCR 分析结果表明，该基因在湖北海棠根中的表达量最大； SA、MeJA 和ACC 明显诱导该基因的表达，ABA 略微诱导该基因的表达；低温诱导该基因的表达，而NaCl 诱导该基 因的表达不明显；生物胁迫苹果轮纹病病原菌和苹果蚜虫诱导该基因的表达。【结论】湖北海棠 MhPR8 可能参与 SA、JA/ET 介导的信号通路中，在湖北海棠抵抗生物胁迫和非生物胁迫中起着非常重要的作用。 关键词：湖北海棠；MhPR8；表达分析；化学试剂；生物胁迫；非生物胁迫 Isolation and Expression of Pathogenesis-Related Protein Gene MhPR8 from Malus hupehensis 1, 2 1 1, 3 1 2 1 ZHANG Ji- yu , QU Shen-chun , Xue Hua-bai , GAO Zhi-hong , GUO Zhong-ren , ZHANG Zhen 1 2 ( College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095 ； Institute of Botany, Jiangsu Province and the 3 Chinese Academy of Sciences, Nanjing 210014; Zhengzhou Fruit Research Institute，Chinese Academy of Agricultural