华南8号木薯及其四倍体块根淀粉及蛋白表达谱的差异分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(13):2656-2665 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.13.017 华南8号木薯及其四倍体块根淀粉及蛋白表达谱的差异分析 1 1 1 2 1 安飞飞 ，陈松笔 ，李庚虎 ，周 锴 ，李开绵 1 2 （中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室，海南儋州 571737 ； 海南大学农学院，海口 571720 ） 摘要：【目的】通过对华南 8 号木薯及其四倍体块根淀粉含量与结构及蛋白质组学分析，揭示染色体加倍对 木薯块根淀粉含量与结构的影响及其蛋白质调控机制。【方法】植后 10 个月收获木薯块根，采用空、水重测定块 根鲜薯的淀粉含量，分光光度法分别测定淀粉中支链淀粉与直链淀粉的比例，采用Excel 2013和DPS v7.05统计 软件对数据进行分析，差异显著性标准采用新复极差法，通过扫描电镜对块根淀粉体的大小、形态及数量进行显 微结构观察，利用蛋白质印迹（Western blot）技术对参与淀粉合成与降解的酶表达水平进行验证，采用双向电 泳技术分离块根蛋白质，Delta 2D软件分析差异倍数在2.0以上的差异蛋白质点，并通过基质辅助激光解析电离 飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-TOF-MS/MS）鉴定差异蛋白质，结合KEGG数据库将其按照功能进行分类。【结果】 木薯染色体加倍后，块根干物率、淀粉含量及单株鲜薯重均显著下降，分别比二倍体降低了 12.18%、11.41%和 35.34%；而淀粉中直链淀粉和支链淀粉比例无显著变化；淀粉体形态无明显差异，主要为球形，不规则球体、椭 球体也有存在，大小较均一，淀粉体排列较为疏松，空间间隙较大，视野内淀粉体数量减少；蔗糖磷酸合成酶（SPS） 表达水平降低，β-淀粉酶表达水平升高，而颗粒结合型淀粉合成酶 I（GBSSI）表达水平无显著变化；经软件分 析得到的 20 个表达差异显著的蛋白质点中上调表达的有 2 个，下调表达的有 18 个；经质谱技术成功鉴定到其中 的 19 个，1 个下调表达的蛋白质点 16 未得到匹配，17 个下调表达的蛋白质其功能涉及到碳代谢及能量代谢（4 个）、结构蛋白（3个）、DNA 和RNA代谢（2 个）、分子伴侣（2个）、HCN 代谢（2个）、抗氧化与解毒（1个）、蛋 白质合成（1 个）及未知功能（2 个）；2 个上调表达蛋白质为茎特异性蛋白 TSJT1。【结论】参与碳代谢及能量代 谢、核酸代谢、分子伴侣等 7 个代谢途径相关蛋白质表达水平下调；淀粉体疏松排列，数量减少；参与淀粉代谢 合成过程的SPS表达水平的下降，参与淀粉降解过程的β-淀粉酶表达水平的升高。表明四倍体块根淀粉合成能力 降低，分解能力提高，从而降低了块根的淀粉含量，而直链淀粉与支链淀粉比例无显著变化。 关键词：木薯；四倍体；块根；淀粉；蛋白质 Comparison Analysis of Starch and Protein Expression Profiles on Cassava Tuberous Roots cv. SC8 and Its Tetraploid 1 1 1 2 1 AN Fei-fei , CHEN Song-bi , LI Geng-hu , ZHOU Kai , LI Kai-mian (1 Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural