黄瓜细胞质型谷氨酰胺合成酶基因(GS1)的克隆及其在低氮条件下的表达.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(15):3100-3107 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.15.011 黄瓜细胞质型谷氨酰胺合成酶基因(GS1)的克隆及其 在低氮条件下的表达 冯 卓，秦智伟，武 涛，何红梅 （东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030） 摘要：【目的】分离和克隆黄瓜谷氨酰胺合成酶GS1 基因，分析其序列特征，了解其在低氮条件下的表达情 况。【方法】依据黄瓜基因组数据库中Csa015274 基因编码区全序列，应用引物设计软件Primer Premier 5.0 设 计引物，从黄瓜叶片cDNA 中克隆该基因，用生物信息学方法对获得的cDNA 序列及推定氨基酸序列进行分析鉴定， 并用实时荧光定量PCR 法研究GS1 基因在不同氮素浓度下的表达变化。【结果】分离到GS1 基因，GenBank 登录号 为JQ277263。该基因长1 071 bp，编码356 个氨基酸，与甜瓜(Cucumis melo L.)GS1 基因同源性高达97%。该基 因编码的蛋白是1 个不稳定的疏水蛋白，无跨膜结构，无信号肽，存在蛋白激酶C 磷酸化位点，酪蛋白激酶Ⅱ磷 酸化位点，N-十四酰化位点，酪氨酸激酶磷酸化位点等活性位点。GS1 基因表达模式分析显示，在低氮条件下， 该基因下调表达，随着氮素浓度的增高GS1 基因的表达量增加。在高浓度的氮素水平下，该基因的表达同样受到 抑制。【结论】成功从黄瓜叶片中分离克隆到GS1 基因，该基因具有已知物种GS1 基因的特征,可用于该基因的功 能研究。 关键词：黄瓜；GS1 基因；克隆；序列分析；低氮 Cloning and Expression of Cytosolic Glutamine Synthetase (GS1) in Cucumis sativus L. Under Low Nitrogen Conditions FENG Zhuo, QIN Zhi-wei, WU Tao, HE Hong-mei (College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Harbin 150030) Abstract: 【Objective 】The purpose of this study is to clone full-length cDNA of key enzyme gene GS1 in plant nitrogen metabolism and to investigate its sequence characteristics and to analyze its expression under low nitrogen conditions. 【Method 】 Sequences of primers were designed based on the Csa015274 gene coding region in the cucumber genome database using Primer Premier 5.0. The gene cDNA sequence was cloned from cucumber leaves using RT-PCR techniques; bioinformatics methods were used to analyze cDNA sequence obtained and putative amino acid sequence, qRT- PCR method were used to study the expression of GS1 gene under