牛fabp3和fabp4基因真核表达载体的构建 及在小鼠成肌细胞中的表达.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(1): 136-145 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.01.016 牛fabp3 和fabp4 基因真核表达载体的构建 及在小鼠成肌细胞中的表达 王 杰, 奥旭东, 李文斌, 白海栋, 岳永莉, 于海泉 （内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室，呼和浩特010021 ） 摘要：【目的】分别构建牛fabp3 和 fabp4 基因真核表达载体，并观察载体转染小鼠成肌细胞后基因的表达 以及对内源fabp3 和fabp4 基因表达的影响，检测肉质性状形成相关基因在转基因细胞中的表达及对内源功能基 因的影响。【方法】 以pDsRED 质粒为骨架载体，分别将人肌红蛋白启动子与目的基因相连、CMV 启动子与红色荧 光蛋白报告基因相连构建肌肉特异性表达fabp3 基因的载体pDsHF3 和表达fabp4 基因的载体pDsHF4；用脂质体 瞬时转染小鼠成肌细胞，72 h 后用2%孕马血清诱导成肌细胞向肌管的分化；利用real-time PCR 技术检测转染前 后成肌细胞中外源牛fabp3 和fabp4 基因和内源小鼠fabp3 和fabp4 基因的表达量。【结果】与对照组相比，小鼠 成肌细胞分别转染pDsHF3 和pDsHF4 表达载体，24 h 后外源牛fabp3 和fabp4 基因均获得高水平的表达，48 h 后 有所回落；而内源小鼠 fabp3 和 fabp4 基因在成肌细胞和诱导分化的肌管细胞中的表达均受到不同程度的影响。 【结论】构建的真核表达载体能在成肌细胞中高效表达，外源牛fabp3 或fabp4 基因的转入能够影响小鼠成肌细 胞及肌管中内源fabp3 和fabp4 基因的表达。 关键词：牛fabp3 基因; 牛fabp4 基因; 成肌细胞; 肌管 Construction of Eukaryotic Expression Vector of Bovine fabp3 or fabp4 Gene and Expression of the Gene in Mouse Myoblasts WANG Jie, AO Xu-dong, LI Wen-bin, BAI Hai-dong, YUE Yong-li, YU Hai-quan (The Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology, Ministry of Education, Inner Mongolia University, Huhhot 010021) Abstract: 【Objective 】The objective of the study is to analyze the intrinsic expression bovine fabp3 and fabp4 genes, and the dynamic changes of fabp3 and fabp4 gene expression after transfected the eukaryotic expression vector into mice myoblasts. 【Method 】 Eukaryotic expression vector pDsHF3 for fabp3 gene, pDsHF4 for fabp4 gene were constructed and transfected into mice myoblasts by using liposome technique . The transfected mice myoblasts were induced differentiation into myotubes by 2% of pregnant m