鸡钙离子结合分子伴侣Calreticulin的结构与功能预测及组织表达特性.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(19):3874-3882 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.19.016 鸡钙离子结合分子伴侣Calreticulin的结构与功能 预测及组织表达特性 王丽丽，李 楠，曹嫦妤，龚都强，于 东，王 伟，李金龙 （东北农业大学动物医学学院，哈尔滨150030） 2+ 摘要： 【目的】揭示鸡组织细胞内质网(endoplasmic reticulum, ER)中关键 Ca 结合分子伴侣钙网蛋白 (calreticulin, CRT)的结构与功能及组织表达特性。【方法】应用 Laser Gene 软件，通过比对 Gene bank 已登 录的12种脊椎动物CRT核苷酸及氨基酸序列以分析其进化关系，利用生物信息学方法预测鸡CRT蛋白的结构与功 能，并采用荧光定量 RT-PCR 方法检测 CRT 在鸡 30 个不同组织中的表达特性。【结果】同源性分析结果显示：鸡 与其他11个物种CRT基因核苷酸序列中，鸡与兔核苷酸序列同源性最高，为78.7%，与虹鳟的同源性最低，为70.5%； 氨基酸序列中，鸡与蛇的亲缘关系最近，为85.0%，与虹鳟的亲缘关系最远，为69.0%，与鼠、猕猴、人、兔、猪、 牛和非洲爪蟾蜍的亲缘关系也相对较近，并均在 80.1%及以上。蛋白结构与功能预测结果为：鸡 CRT 由 404 个氨 基酸组成，相对分子质量46.8802 kD，理论等电点为4.41，负电荷氨基酸残基数为102，正电荷氨基酸残基数为 53，分子式为 C H N O S ，鸡 CRT 具有 22 个疏水区域，其 C 端与 N 端具有很高的疏水性，而 C 端的亲水性要 2074 3107 543 684 9 强于N端，且形成 α -α -β -β -β -β -β -β -β -β -β -β -β - 1(7-17) 2(22-25) 1(26) 2(38-41) 3(50-54) 4(69-70) 5(75-82) 6(92-99) 7 (110-114) 8(129-133) 9(144-151) 10(171-178) 11(183-187) β12(314-322)-β13(326-332)-α3(337-348)-α4(350-375)-α5(377-379)-α6(395-401) 的二级结构。CRT 蛋白属于跨膜蛋白，存在信号肽，且为分泌蛋 白，酶分类属于 EC 5 或 EC 8。组织表达检测结果表明：CRT 基因在鸡各组织中广泛表达，其中 在回肠、腺胃和十二指肠等组织中表达量较高，且高出肾脏（对照）20倍以上。【结论】鸡CRT核苷酸及氨基酸 序列在 12 种脊椎动物物种中具有相对保守性，鸡 CRT 为跨膜分泌蛋白，为酸性蛋白，属于 α-N-阿拉伯糖苷酶或 Tentoxilysin，催化 α-L-阿拉伯糖苷内的终端非还原性α-L-阿拉伯呋喃糖苷残基的水解，作用于 α-L-阿拉伯呋 喃糖苷、含（1,3）和/或（1,5）糖苷键的阿拉伯聚糖、阿拉伯木聚糖和阿拉伯半乳聚糖，能与糖类分子及Ca2+特 异性结合，可监控糖蛋白组装折叠及Ca2+调控，且在消化系统中发挥重要作用。 关键词：鸡；Calreticulin；结构与功能；组织表达特性；进化关系 Structures and Functions Prediction and Expression Profiles of Calreticulin as Calcium Binding Chaperones in