葡萄花发育基因的亚细胞定位和表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(3):641-650 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.03.027 葡萄花发育基因的亚细胞定位和表达分析 1 1 1 2 1 1 杨 光 ，曹 雪 ，房经贵 ，黄振喜 ，陶建敏 ，王 晨 1 2 （南京农业大学园艺学院/江苏省果树品种改良与种苗繁育工程中心，南京 210095 ； 山东德州学院农学系，山东德州253023 ） 摘要： 【目的】分离和克隆葡萄品种‘香悦’ Vitis vinifera AGAMOUS (VvAG)、Vitis vinifera APETALA 3 (VvAP3)、Vitis vinifera FLOWERING LOCUS C (VvFLC)、Vitis vinifera FRUITFUL (VvFUL)、Vitis vinifera FLOWERING LOCUS T (VvFT)、Vitis vinifera APETALA2 (VvAP2)和 Vitis vinifera SUPPRESSOR OF OVER EXPRESSION OF CO 1 (VvSOC1)7 个重要花发育相关基因的 ORF 序列，并对其进行亚细胞定位与表达分析。【方法】采用特异 引物RT-PCR方法克隆基因，并用半定量PCR法研究各基因在不同组织的表达，构建亚细胞定位载体，基因枪转化 洋葱表皮细胞，25℃暗培养24 h后激光共聚焦显微镜下观察。【结果】对上述基因在葡萄不同组织器官中的表达 水平进行分析发现，它们的表达不存在组织器官的特异性，但有表达强弱差异。其中，VvFT、VvFUL、VvAP3 在葡 萄幼果中表达量最高，VvAG 与 VvAP2 在花中表达量最高，而 VvSOC1 与 VvFLC 在幼叶中表现出最高的表达水平。 VvSOC1、VvFT、VvFLC 和 VvAP2 与 GFP 融合蛋白仅在核内产生绿色荧光，表现出转录因子的典型特点；而 VvAG、 VvFUL 和 VvAP3 与 GFP 融合蛋白在细胞质膜和细胞核上均产生绿色荧光信号。【结论】这 7 个基因与葡萄的花与 果实以及营养器官的发育都存在相关性，7个葡萄花发育相关的转录因子都呈现出细胞核内作用的特点，但VvAG、 VvFUL和VvAP3 也表现出在细胞膜区域定位的现象。 关键词：葡萄；花发育；亚细胞定位；表达分析；VvAG；VvAP3；VvFLC；VvFUL；VvFT；VvAP2；VvSOC1 Sub-Cellular Localization and Expression Analysis of Genes Involved in Grapevine Floral Development 1 1 1 2 1 1 YANG Guang , CAO Xue , FANG Jing-gui , HUANG Zhen-xi , TAO Jian-min , WANG Chen 1 ( College of Horticulture, Nanjing Agricultural University/Fruit Crop Variety Improvement and Seedling Propagation