己烯雌酚特异性抗体的制备.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(5):1524-1529 Scientia Agricultura Sinica 己烯雌酚特异性抗体的制备 岳 磊，单国强，刘雅红，贺利民，张 琴 （华南农业大学兽医学院药理研究室，广州 510642 ） 摘要：【目的】制备抗己烯雌酚（DES）的高亲和力特异性抗体，建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线， 为进一步研究DES快速检测试剂盒打下基础。【方法】应用DES人工免疫抗原免疫新西兰大白兔，采集抗DES的特 异性抗血清，用KCjunior软件进行4参数非线性回归，建立检测DES 的间接竞争ELISA标准曲线，各药物浓度在 同一批次酶标板中做4次重复，共做4个批次对标准曲线进行评价，用己烷雌酚（HEX）、双烯雌酚（DIEN）、雌二 醇（E2）、乙炔雌二醇（EE2）和 L-酪氨酸（Tyr）来评价抗体的特异性。【结果】5 只家兔免疫产生了抗 DES 的特 异性抗血清，其中 4 号家兔抗血清效价达到了 1 ﹕4 096 000 竞争抑制效果最好，工作稀释浓度为 1 ﹕1 024 000 时，线性范围在0.01～50 μg·L-1 -1 2 ，标准曲线的IC 在0.71～1.0 μg·L ，R 在0.9952～0.9978。获得各标准浓度 50 下B/B0 的批内变异系数在0.52%～22.48%，批间变异系数在2.64%～19.51%。交叉反应试验表明，4号家兔抗血清 对与 DES 结构相似的人工合成二苯乙烯类雌激素药物己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚（DIEN）的交叉反应率分别为 8.5%和 38.5%，与天然雌激素类药物雌二醇（E2）和乙炔雌二醇（EE2）以及 L-酪氨酸（Tyr）的交叉反应均小于 0.001%。【结论】本文报道的抗体特异性好、亲和力高，可满足目前中国动物性食品安全评价检测的需要，为研究 组织中DES残留检测的ELISA方法及其开发DES快速检测试剂盒奠定了基础。 关键词：己烯雌酚；抗血清；间接竞争ELISA Development of Antibodies Against Diethylstilbestrol YUE Lei, SHAN Guo-qiang, LIU Ya-hong, HE Li-min, ZHANG Qin (College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642) Abstract: 【Objective 】To raise high antibodies against diethylstilbestrol (DES), and DES calibration curve in order to lay a foundation base for development of DES detect kit. 【Method 】New Zealand white rabbits were immunized with DES complete antigen, DES calibration curves were made with KCjunior software according to 4-parameter model, HEX, DIEN, E2, EE2 and Tyr were employed to assess specificity of the antibodies. 【Result 】Five rabbit antisera against DES were obtained by immunizing rabbits with DES