口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建及VP1基因稳定表达细胞系的建立.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(16):3455-3460 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.16.023 口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建 及VP1基因稳定表达细胞系的建立 1，2 1 1 1 3 2 1 1 代文君 ，王洪梅 ，刘 晓 ，高运东 ，于 力 ，王立群 ，仲跻峰 ，何洪彬 1 2 3 （山东省农业科学院奶牛研究中心，济南 250100 ；东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030 ；中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150001 ） 摘要： 【目的】构建口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1，并建立稳定表达VP1基因的BHK-21细胞 系。【方法】采用RT-PCR技术从口蹄疫病毒材料中扩增出VP1基因，并将其连入慢病毒载体FG9 中，经PCR、酶 切和测序鉴定正确后，转染 BHK-21 细胞，96h 后经流式细胞分选筛选 GFP 阳性细胞，细胞增殖后经 WB 检测 VP1 基因的表达。【结果】VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1 测序正确，转染BHK-21细胞经流式细胞仪筛选的GFP阳 性细胞后可稳定表达 VP1 基因。【结论】VP1 基因重组慢病毒载体构建成功并获得了稳定表达 VP1 基因的 BHK-21 细胞系。 关键词：口蹄疫病毒；VP1；转染；稳定细胞系 Construction of VP1 Recombinant Lentivirus Vector and Establishment of BHK-21 Cell Lines Stably Expressing VP1 Gene of FMDV 1,2 1 1 1 3 2 DAI Wen-jun , WANG Hong-mei , LIU Xiao , GAO Yun-dong , YU Li , WANG Li-qun , 1 1 ZHONG Ji-feng , HE Hong-bin 1 2 ( The Research Center of Dairy Cow, Shandong Academy of Agricultral Science, Jinan 250100; College of Life Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030 ; 3Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001) Abstract: 【Objective 】 To construct the lentivirus vector contain