食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(9): 1873-1880 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.09.024 食品中4 种肉类成分多重PCR 的快速鉴别方法 1 2 1 1 2 何玮玲 , 张 驰 , 杨 静 , 黄 明 , 杨 军 1 2 （南京农业大学食品科技学院/ 肉品加工与质量控制教育部重点实验室，南京 210095 ； 南京市产品质量监督检验院，南京 210028 ） 摘要：【目的】建立快速可靠的用于食品中 4 种肉类（猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉）成分快速鉴别的通用引物 多重PCR （universal primers-multiplex PCR，UP-M-PCR）方法。【方法】使用DNeasy 试剂盒提取法、SDS-蛋白 酶K 法和CTAB-蛋白酶K 法分别提取肉类中总DNA，通过比较提取效率和纯度，确定提取肉类中总DNA 的方法；基 于动物线粒体细胞色素b 基因的差异性位点，设计两组各5 条长度不同的多重PCR 引物，建立并优化多重PCR 反 应体系，通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4 种肉类的快速鉴别；应用优化的多重PCR 方法对80 份市售食品 样本进行盲样检测，验证鉴别方法的准确性。【结果】SDS-蛋白酶K 法与DNeasy 试剂盒提取法的DNA 效率显著优 于CTAB-蛋白酶K 法；在优化的反应条件下，选择特异性高、序列较长的多重PCR 引物可有效地进行食品中猪、 牛、羊和鸡源性成分的快速鉴定，检测灵敏度达到皮克级DNA；对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结 论】多重PCR 方法精确稳定，可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。 关键词：多重PCR; 鉴别; 猪肉; 牛肉; 羊肉; 鸡肉 A Quick Multiplex PCR Method for the Identification of Four Meat Ingredients in Food Products 1 2 1 1 2 HE Wei-ling , ZHANG Chi , YANG Jing , HUANG Ming , YANG Jun 1 ( College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University/Key Laboratory of Meat Processing and Quality 2 Control, Ministry of Education, Nanjing 210095 ; Nanjing Institute of Supervision and Testing on Product Quality, Nanjing 210028) Abstract : 【Objective 】An accurate and reliable universal primers-multiplex PCR (UP-M-PCR) method was developed to identify 4 kinds of meat ingredient (chicken, beef, lamb, pork) in food pr