梨CBL基因家族全基因组序列的鉴定及非生物胁迫下的表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(4):735-747 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.04.11 梨CBL基因家族全基因组序列的鉴定 及非生物胁迫下的表达分析 许园园，蔺 经，李晓刚，常有宏 （江苏省农业科学院园艺研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室，南京 210014 ） 摘要：【目的】最近在植物中发现了一类Ca2+传感蛋白——类钙调磷酸酶B亚基蛋白CBL （calcineurin B-like proteins），CBL 及其靶蛋白 CIPK（CBL-interacting protein kinase）构成 CBL/CIPK 信号网络系统，在植物干 旱、盐渍、低温等逆境胁迫应答中起重要作用。鉴定梨基因组中 CBL 家族基因成员，对其基因进化、结构与表达 特征进行分析，为植物CBL基因功能分析与利用提供依据。【方法】通过生物信息学手段，结合梨基因组注释信息， 鉴定梨CBL家族成员序列信息；利用MEGA6.0程序进行多序列比对、分类并构建系统进化树；利用per1程序、GSDS 工具以及Clustal X软件进行基因结构与保守性分析；通过qRT-PCR技术进行多种非生物胁迫处理下 PbCBLs 表达 分析。【结果】成功鉴定出7 个CBL家族成员，基因结构预测表明PbCBL9 含5个内含子，其余 PbCBLs 均含有7— 8个内含子；预测的 PbCBLs 均含4个EF-hand功能域，且相邻EF-hand功能域之间氨基酸数目非常保守；通过系 统发育树分析，将 7 个 PbCBLs 分为 2 类；qRT-PCR 技术进行不同胁迫处理下杜梨叶片 PbCBLs 的表达分析，结果 表明，在 NaCl 胁迫下，PbCBL1 表达量 6 h 降至最低，24 h 则明显升高；与之相反，PbCBL2 和 PbCBL3 的表达量 在6 h达最高，24 h最低；PbCBL4 和 PbCBL8 表达量在3 h 明显增加，随后表达量下降；PbCBL9 表现明显的上调 趋势，24 h达到最大；PbCBL10 则在6 h表达量最高。10%（w/v）PEG6000胁迫处理下，PbCBL2、PbCBL4 和 PbCBL8 表达量上调，PbCBL1 表达量下调；PbCBL3、PbCBL9 和 PbCBL10 表达量均在 6 h最低，12 h和24 h 较6 h明显升 高， PbCBL3 和 PbCBL10 于24 h 表达量达到最高，而 PbCBL9 在 12 h 表达量最高。4℃低温处理下，PbCBL2、PbCBL4、 PbCBL8 表达量上调；而 PbCBL1 和 PbCBL3 表达量下调；PbCBL9 和 PbCBL10 表达量表现上下波动的变化趋势，均 在 3 h 有明显增加，随后显著降低。42℃高温胁迫处理下，PbCBL1、PbCBL3 和 PbCBL4 表达量下调；PbCBL2 表 达量整体上调，6 h 达到最高；PbCBL8、PbCBL9 和 PbCBL10 总体呈现相同的变化趋势，在 3 h 表达量达到最高， 随后明显下降。ABA 处理下，PbCBL3 和 PbCBL10 表达量下调，PbCBL2 与 PbCBL8 表达量上调；PbCBL1 在 6 h 表 达量最高；PbCBL4 和 PbCBL9 表达量呈现相似的变化趋势，3 h 明显升高，随后下降，24 h 时最低。【结论】成 功鉴定的 7 个候选 PbCBLs 中，2 个基因（PbCBL8 和 PbCBL9 ）受盐胁迫诱导表达，3 个基因（PbCBL2、PbCBL4 和 PbCBL8 ）分别受干旱、低温与 ABA 诱导表达。PbCBL2 在高温胁迫下被强烈诱导可能意味着其在高温应答中发 挥重要作用。 关键词：梨；CBL家族基因；全基因组鉴定；系统进化；胁迫响应；基因表达 Identification and Expression Analysis under Abiotic Stresses o