枯草芽胞杆菌Bs916突变体库的构建和抑制水稻 细菌性条斑病菌相关基因的克隆.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(11):2232-2239 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.11.006 枯草芽胞杆菌Bs916 突变体库的构建和抑制水稻 细菌性条斑病菌相关基因的克隆 1，2 1，2 2 2 2 周华飞 ，罗楚平 ，王晓宇 , 张荣胜 ，陈志谊 1 2 （南京农业大学植物保护学院，南京210095 ； 江苏省农业科学院植物保护研究所，南京210014 ） 摘要：【目的】采用转座子标签技术构建枯草芽胞杆菌Bs916 突变体库，从突变体库中筛选对水稻细菌性条 斑病菌抑菌效果发生显著变化的菌株并克隆插入位点的基因，获得生防菌Bs916 中与抑制细菌活性可能相关的基 因。【方法】携带转座子TnYLB-1 的穿梭载体pMarA 通过化学转化方法转化至枯草芽胞杆菌Bs916 菌株，构建随机 插入突变体库。通过平板抑菌试验从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果得到显著提高和下降的突变 体；并采用PCR 和Southern Blot 验证转座子是否成功插入到Bs916 染色体基因组上，利用反向PCR 技术克隆转 座子插入位点基因、测序并进行生物信息学分析。【结果】成功构建了枯草芽胞杆菌Bs916 的转座子随机插入的突 变体库；PCR 和Southern Blot 结果表明转座子成功的插入到染色体基因组上，约85%突变体以单拷贝形式插入； 筛选出30 株对水稻细菌性条斑病菌抑制效果发生显著变化的菌株，克隆到21 个突变体插入位点的基因序列并测 序。生物信息学分析结果表明这些基因与感受态形成、生物膜形成和次生产物代谢相关。【结论】成功构建了Bs916 突变体库，克隆到该库中对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果显著变化菌株的突变位点基因，这些基因推测可能与枯 草芽胞杆菌Bs916 中的抑制细菌化合物的合成代谢及调控相关。 关键词：枯草芽胞杆菌；突变株；水稻细菌性条斑病菌；抑菌基因；克隆 Construction of Bacillus subtilis Bs916 Mutant Libraries by Transposon Tagging and Cloning the Genes to the Organism’s Anti-Bacterial Activities 1,2 1,2 2 2 2 ZHOU Hua-fei , LUO Chu-ping , WANG Xiao-yu , ZHANG Rong-sheng , CHEN Zhi-yi 1 2 ( College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095; Institute of Plant Protection, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014 ) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to construct Bacillus su