斯氏艾美耳球虫MIC-5与兔IL-15基因在真核细胞中的共表达.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(19):4096-4101 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.19.021 斯氏艾美耳球虫MIC-5 与兔 IL-15 基因 在真核细胞中的共表达 1，2 1，2 1 1 1 1 孟庆玲 ，乔 军 ，才学鹏 ，田广孚 ，闫鸿斌 ，骆学农 1 2 （中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046 ； 石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003 ） 摘要： 【目的】构建能在真核细胞中共表达斯氏艾美耳球虫微线蛋白5 （MIC-5）和兔IL-15 重组载体，为进 一步研究抗斯氏艾美耳球虫的免疫调节性DNA 疫苗奠定基础。【方法】将斯氏艾美耳球虫MIC-5 和兔IL-15 基因， 克隆到真核双表达载体pBudce4.1 中，应用脂质体介导法将构建的重组质粒pB-MIC-5-IL-15 转染BHK-21 细胞。 在转染后，用RT-PCR 法和间接免疫荧光试验（IFA）分别检测MIC-5 和IL-15 基因在BHK-21 细胞中的转录和表达 情况。【结果】在重组质粒pB-MIC-5-IL-15 转染BHK-21 细胞24 h 后即可检测到MIC-5、IL-15 基因进行了转录； 在转染36、48、72h 后，MIC-5 和IL-15 基因可同时在BHK-21 细胞中表达。【结论】成功构建了含有斯氏艾美耳 球虫MIC-5 和兔IL-15 基因的重组载体，实现了两种基因在真核细胞中的共表达，为抗斯氏艾美耳球虫的免疫调 节性DNA 疫苗研制奠定了基础。 关键词：斯氏艾美耳球虫; MIC-5; 兔IL-15; 共表达 Co-expression of MIC-5 Gene of Eimeria stiedai and Rabbit IL-15 in Eucaryotic Cell Line 1,2 1,2 1 1 1 1 MENG Qing-ling , QIAO Jun , CAI Xue-peng , TIAN Guang-fu , YAN Hong-bin , LUO Xue-nong (1State Key Lab of Veterinary Etiological Biology/Lanzhou Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046 ; 2College of Animal Science and Technology，Shihezi University ，Shihezi 832003，Xinjiang ) Abstract: 【Objective 】 The aim of this study is to construct a recombinant co-expression vector expressing Eimeria stiedai microneme protein 5 (MIC-5) and rabbit IL-15 in eukaryotic cells, which may lay a foundation for further study immune regulatory DNA vaccine against infection of Eimeria stiedai . 【Meth