同时检测牛奶中喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法研究.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(19):3883-3889 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.19.017 同时检测牛奶中喹诺酮类和庆大霉素残留的 胶体金免疫层析方法研究 1,2 1 1 2 1 2 1 3 1 李向梅 ，王战辉 ，肖希龙 ，王照鹏 ，温 凯 ，吴小平 ，夏 曦 ，武晋孝 ，江海洋 1 2 3 （中国农业大学动物医学院，北京 100193 ； 北京维德维康生物技术有限公司，北京 100095 ； 山西省饲料兽药监察所，太原 030027 ） 摘要：【目的】喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 都具有显著的抗菌效果，是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可 能导致对人类健康的危害，因此，为了保护消费者的健康，研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残 留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。【方法】建立了同时检测牛奶中 13 种喹诺酮类和庆大 霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体 按比例进行混合标记。同时，采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的pH值和抗体用量对灵敏度的影响， 并对这两类药物抗原的包被条件进行选择确定。在此基础上研发出可同时检测牛奶中13种喹诺酮类药物和庆大霉 素的胶体金快速检测试纸条，试纸条采用直接竞争法原理。【结果】该方法可同时检测恩诺沙星、环丙沙星、诺氟 沙星、氟甲喹、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、噁喹酸、麻保沙星、氟罗沙星、奥比沙星、达氟沙星和洛美沙 星这13种喹诺酮类药物和庆大霉素，对其他喹诺酮类药物如：沙拉沙星、二氟沙星、司帕沙星、帕珠沙星等无交 叉反应，同时对其他氨基糖苷类药物如：链霉素、新霉素、卡那霉素等也无交叉反应。该试纸条对牛奶中这13 种 喹诺酮类药物和庆大霉素的检测限均为20 ng·mL-1 ，完全满足国家对这两类药物的残留限量要求。牛奶样本直接检 测，无需处理，整个检测过程5 min内完成。【结论】采用该方法和HPLC-MS/MS对60 份牛奶盲样进行比对试验， 阳性样品全部检出，同时筛选方法未出现假阳性和假阴性现象，二者的测定结果基本相符，表明该方法准确可靠， 适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。实际操作过程中，可以采用胶体金免疫层析对样品进行现场快速初筛； 筛选的疑似阳性样品，可以采用HPLC-MS/MS方法对样品中QNS和GEN 的含量进一步确认。 关键词：喹诺酮类；庆大霉素；残留；胶体金免疫层析 Development of a Colloidal Gold Immunochromatographic Technique for Simultaneous Detection of Quinolones and Gentamicin in Milk 1,2 1 1 2 1 2 LI Xiang-mei , WANG Zhan-hui , XIAO Xi-long , WANG Zhao-peng , WEN Kai , WU Xiao-ping , 1 3 1