小麦生理型雄性不育系微丝骨架和胼胝质的变化与其相关基因的表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(14):2687-2696 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.14.001 小麦生理型雄性不育系微丝骨架和胼胝质的变化 与其相关基因的表达分析 1 1,2 1 1 1 1 1 1 张 姣 ，朱启迪 ，巨 岚 ，张改生 ，于永昂 ，牛 娜 ，王军卫 ，马守才 1 （西北农林科技大学农学院/ 国家杨凌农业生物技术育种中心/ 国家小麦改良中心杨凌分中心/小麦育种教育部工程研究中心/ 陕西省作物杂种优势研 2 究与利用重点实验室，陕西杨凌 712100 ； 河南科技学院生命科技学院，河南新乡 453003 ） 摘要： 【目的】研究生理型雄性不育小麦花粉细胞内微丝和胼胝质的结构及其相关基因的表达，并揭示其与 生理型雄性不育的关系，为进一步研究化学杂交剂SQ-1诱导小麦生理型雄性不育的机理提供一定的理论依据。【方 法】以化学杂交剂 SQ-1 诱导的生理型雄性不育系 ms(A)-西农 1376 及对应正常可育系(A)-西农 1376 为试材，用 TRITC-phalloidin 标记细胞内微丝，苯胺蓝标记胼胝质，qRT-PCR 技术分别对肌动蛋白解聚因子 TaADF （Actin depolymerizing factor）、类葡聚糖合成酶 TaGSL （Glucan synthase-like）进行差异表达分析。【结果】(1)在 减数分裂前期Ⅰ、中期Ⅰ、后期Ⅰ这 3 个时期，生理型雄性不育系花粉细胞的微丝结构与可育系没有显著差异： 前期Ⅰ，微丝分布于整个细胞质中，细胞核区域也可见少量微丝环绕细胞核；中期Ⅰ，微丝分布在细胞质中， 在形成纺锤体部位染色更深，形成纺锤体微丝，由细胞两极发出的纺锤体微丝伸向赤道板；后期Ⅰ，在向两极 移动的染色体的中间部位染色较深，微丝分布较多。(2)在早末期Ⅰ，与可育系相比，不育系花粉细胞没有形成 清晰且明显可见的中国灯笼状成膜体微丝结构，且在细胞中线部位亦没有清晰可见的微丝累积。(3)晚末期Ⅰ， 可育系花粉细胞在形成细胞板的部位是线性的、平滑的，成膜体微丝消失，而不育系花粉细胞在形成细胞板的 部位形成了很大的缝隙，同时，可育系胼胝质在细胞板处的沉积比较平滑，而不育系胼胝质在细胞板处的沉积 较可育系相比缺乏，并且是褶皱的、有裂纹的。(4)四分体时期，可育系花粉可见围绕细胞核的辐射状微丝，不 育系花粉细胞中微丝呈模糊状态，并且不育系中胼胝质染色的整体荧光强度较可育系减弱。利用实时荧光定量 PCR 技术分析肌动蛋白解聚因子 TaADF 和类葡聚糖合成酶 TaGSL 在减数分裂期的相对表达量，结果发现，不育 系中 TaADF 的相对表达量是可育系的 4.28 倍，由于 TaADF 表达量上调，加剧了细胞内微丝解聚，微丝结构受到 破坏，同时不育系中 TaGSL 表达量下降，只有可育系的 0.83 倍，胼胝质的沉积也受到影响。【结论】TaADF 在 不育系中上调表达，破坏了细胞内微丝的正常结构，使微丝不能正常行使其功能，进而可能导致花药发育中与 育性相关的某些代谢通路等受到影响。与此同时，微丝结构的破坏导致细胞板形成出现异常也可能是引起胼胝 质在细胞板处沉积受到影响的一个重要原因。因此，微丝和胼胝质的异常变化与化学杂交剂 SQ-1 诱导的生理型 雄性不育密切相关。 关键词：普通小麦；生理型雄性不育；减数分裂；微丝骨架；胼胝质 Organization Changes of Actin Cytoskeleton and Callose with the Expression Analysis of Related Genes in Physiological Mal