小麦过氧化物还原酶基因TaPrx的克隆与功能初步分析.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(4):1222-1229 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.013 小麦过氧化物还原酶基因 TaPrx 的克隆与功能初步分析 1 1 1 1 2 1 1 1 1,2 张海燕 ，李国田 ，王晓杰 ，段迎辉 ，徐亮胜 ，郭 军 ，马金彪 ，黄丽丽 ，康振生 1 2 （西北农林科技大学植物保护学院，陕西杨凌 712100 ； 西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】克隆TaPrx 基因并对其在小麦与条锈菌互作中的功能进行初步分析。【方法】利用PCR方法结 合RACE技术在 cDNA文库中筛选得到 TaPrx 基因的全长序列并进行生物信息学分析，然后克隆至pET-32a(+)，转 化 E.coliBL21(DE3)后用 IPTG 进行诱导表达。通过 Real-time RT-PCR 进行表达模式分析。【结果】得到 TaPrx 基因的全长序列688 bp，ORF489 bp，编码162个氨基酸残基，分子量17.36 kD，等电点 5.32，含一个保守的半 胱氨酸残基（Cys），不含信号肽及跨膜结构域，亚细胞定位94%的可能性在细胞质。TaPrx 融合蛋白分子量38 kD， 最佳 IPTG 诱导浓度 0.05 mmol·L-1 ，20℃诱导 20 h 可得到最大量的融合蛋白。Real-time RT-PCR 分析表明 TaPrx 基因在小麦与条锈菌的亲和与非亲和互作中均受诱导表达，分别在接种后 24 h、18 h 达到表达高峰。【结论】获 得了 TaPrx 基因特异性的多克隆抗体；TaPrx 基因受条锈菌诱导表达，可能参与了小麦与条锈菌互作。但是否参 与了小麦受条锈菌侵染后产生的ROS的清除与调节仍需进一步验证。 关键词：小麦；条锈菌；TaPrx；克隆；原核表达；Real-time RT-PCR Cloning and Primary Characteration Analysis of Peroxiredoxin Gene (TaPrx) from Wheat 1 1 1 1 2 1 ZHANG Hai-yan , LI Guo-tian , WANG Xiao-jie , DUANG Ying-hui , XU Liang-sheng , GUO Jun , 1 1 1,2 MA Jin-biao , HUANG Li-li , KANG Zhen-sheng 1 2 ( College of Plant Protection, Northwest Agricultural and Forestry University, Yangling 712100, Shaaxi; Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture, Northwest A