小麦3种病毒病BSMV、BYDV-PAV、WYMV及WBD植原体病害的多重PCR同步检测.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(9):2663-2669 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.09.013 小麦3种病毒病BSMV、BYDV-PAV、WYMV及WBD 植原体病害的多重PCR同步检测 1,2 2 2 2 2 2 岳红妮 ，吴云锋 ，李毅然 ，魏 婷 ，侯 伟 ，武科科 1 2 （西北农林科技大学生命科学学院； 西北农林科技大学植物保护学院/ 陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】通过对检测小麦病毒病和植原体病害的多重 PCR 体系各成分和循环参数进行摸索和优化，建 立了一种同时检测大麦条纹花叶病毒（ barley stripe mosaic virus，BSMV）、大麦黄矮病毒 PAV株系（barley yellow dwarf virus，BYDV-PAV）、小麦黄花叶病毒（wheat yellow mosaic virus，WYMV）和小麦蓝矮植原体（wheat blue dwarf，WBD）的多重PCR技术体系。【方法】运用根据3 种病毒核苷酸保守区序列设计的特异性引物对、根据WBD 植原体核糖体蛋白基因序列设计特异性引物对rpF1/R1，从影响多重PCR（M-PCR）扩增的引物浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等方面进行多重PCR体系的优化。【结果】成功的在一个体系中对BSMV、 BYDV-PAV、WYMV和WBD复合侵染的小麦材料进行多重PCR 扩增，得到503、600、898、1 240 bp 4条特异性大小 与试验设计相符的条带，建立了同时检测4种病原的多重PCR体系。【结论】该体系实现了植原体DNA病原和病毒 RNA病原的同时检测，体现了多重PCR的优越性。 关键词：小麦；多重PCR；病毒；植原体 Simultaneous Detection of Three Wheat Virus BSMV, BYDV-PAV, WYMV and WBD Phytoplasma by Multiplex PCR 1,2 2 2 2 2 2 YUE Hong-ni , WU Yun-feng , LI Yi-ran , WEI Ting , HOU Wei , WU Ke-ke 1 2 ( Colleges of Life Sciences, Northwest Agricultural and Forestry University, Yangling 712100, Shaanxi; College of Plant Protection and Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture, Northwest Agricultural and Forestry University, Yangling 712100, Shaanxi) Abstract: 【Objec