小麦avenin-like的克隆、原核表达与品质效应研究.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(4):607-616 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.04.001 小麦avenin-like的克隆、原核表达与品质效应研究 1 1,2 1,2 1,2 1 1,2 1,2 1 魏 慧 , 董 剑 , 陈其皎 , 高 翔 , 王 蕾 , 李晓燕 , 赵万春 , 吴 丹 1 2 （西北农林科技大学农学院，陕西杨凌 712100； 陕西省小麦新品种培育工程研究中心，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】研究普通小麦不同品种的类燕麦贮藏蛋白（avenin-like）基因序列的多样性及其表达产物的 加工品质效应。【方法】利用特异性引物对来源于不同地区的 12 个小麦品种（系）进行PCR 扩增、克隆、测序及 序列分析；构建JN542444 原核表达载体后转入表达菌株Escherichia coli Rosetta gami B(DE3)，IPTG 诱导融 合蛋白表达，并通过His-Trap HP 柱纯化蛋白后进行微量掺粉试验。 【结果】克隆获得22 条avenin-like 新基因 序列（GenBank 登录号JN542443—JN542464），长度均为855 bp，且均具有可编码284 个氨基酸残基的完整的开 放阅读框，无内含子；半胱氨酸数目及位置相对保守，除JN542452 含有 17 个Cys 外，其余avenin-like 所编码 的蛋白质序列均含有18 个Cys，且位置相同，预测可能形成7 个分子内二硫键和4 个分子间二硫键；发现3 条罕 见的avenin-like 假基因（JN542448、JN542455 和JN542456），均因终止密码子的提前出现引起基因沉默；7 份 小麦品种共享一条 avenin-like 亚基，并与 GenBank 中来自普通小麦的HM027636 完全一致，暂将该亚基命名为 “Avenin-like Ⅰ”；系统演化分析表明avenin-like 编码蛋白与LMW-GS 关系最近，与ω-gliadin 的亲缘关系最 远；SDS检测融合蛋白成功表达，对纯化蛋白进行微量掺粉试验，发现Avenin-like Ⅰ型蛋白亚基对小麦加 工品质具有显著的正向效应。【结论】avenin-like 在供试小麦品种中具有很低的多态性，且Avenin-like Ⅰ型亚 基能提高面粉加工品质。 关键词：小麦；avenin-like 蛋白；原核表达；品质效应 Cloning, Prokaryotic Expression and Quality Effective Analysis of avenin-like Genes from Wheat Cultivars 1 1,2 1,2 1,2 1 1,2 WEI Hui , DONG Jian , CHEN Qi-jiao , GAO Xiang , WANG Lei , LI Xiao-yan , ZHAO Wan-chun1,2, WU Dan1 1 2 ( College of Agronomy, Northwest AF University, Yangling 712100, Shaanxi; New Varieties Cultivation of Wheat Engi