ac-a和pd-i对小鼠卵泡的发育和卵母细胞成熟的影响.pdf

Anhui Agricultural University Master Degree Thesis Effects of AC-A and PDE-I on the follicles development and meiotic resumption of immature mouse oocytes Postgraduate: Yang Pan Supervisor: Prof. Cao Hongguo Co-supervisor: Associate Prof. Zhang Xiaorong College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, 230036 本项研究受下列基金资助 国家自然基金（编号 国家863 项目（编号：2011AA100307） 国家转基因项目（编号：2009ZX08008-007B） SUPPORT BY National Natural Science Foundation of China (No. National High-Tech RD Program (No. 2011AA100307) National Transgenic Breeding Program (No. 2009ZX08008-007B) 摘要 卵巢中可利用的卵母细胞的数量是有限的，尤其是人的卵巢中卵母细胞的数量 更是屈指可数。为了能够在体外获得大量的卵母细胞，开发利用卵泡中的腔前卵泡 成为重要的研究项目。以小鼠作为模式动物研究卵泡在体外发育和卵母细胞发生减 数分裂的影响因素，能更好的了解卵母细胞成熟的机制，为进一步在体外获得大量 卵母细胞提供参考。本实验通过添加酰胺酸环化酶激活剂(Adenosine Cyclase Activator, AC-A) ，Forskolin 和磷酸二酯酶抑制剂(Phosphodiesterase Inhibitor, PDE- I) ，Cilostamide ，它们的作用分别是促进环磷腺苷酸(Cyclic Adenosine 3,5- monophosphate, cAMP) 的合成和阻滞 cAMP 的降解，以期获得减数分裂效率高、质 量好的卵母细胞。 实验一 利用悬滴法培养16.5dpc (days postcoitum) 的胎鼠卵巢组织，通过每2d 更 换一次卵巢培养基，从第 6d 开始能够看到卵泡的生长。大约培养 14d(相当于 10dpp) 后机械法分裂卵巢组织，游离出大量透明带较薄的 GV 裸卵，部分卵泡直径约60μm 左右。 实验二 利用悬滴法培养新生3dpp( days postpartum)小鼠的卵巢组织，每2d 更换 一次卵巢培养基，大约培养7d (相当于 10dpp) 后机械法分裂卵巢组织，绝大多数是 80-90μm 的卵泡，个别裸卵呈现出正常的透明带。 实验三 研究将Forskolin 和Cilostamide 添加至二级卵泡培养基中对卵泡在体外 长期培养的影响。实验组分别添加 10μM Forskolin 和 10μM Cilostamide ，对照组不 添加。结果显示，二级卵泡在体外培养 12d ，不管是单独添加还是联合添加 Forskolin 和 Cilostamide 并没有改变二级卵泡存活率。在 hCG 和 EGF 的刺激下诱导 类囊腔的卵泡释放粘液化的 COCs，而体外成熟这些 COCs 仍能够排出 PB1 或进行 孤雌激活。 实验四 旨在研究Forskolin 和 Cilostamide 对卵母细胞成熟的影响，以利于筛出 与卵母细胞减数分裂有关的基因。本实验通过在体外成熟培养基中单独或联合添加 10μM